عنوان پایان‌نامه
بیان ژن گریفیتسین از جلبک قرمز(Greffithsia sp)در توتون
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی -بیوتکنولوژی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6142;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 65790
- تاریخ دفاع
- ۲۹ شهریور ۱۳۹۳
- دانشجو
- شکوفه صدراوی
- استاد راهنما
- محمدرضا بی همتا, هوشنگ علیزاده
- چکیده
- بیماری ایدز، توسط ویروس HIV ایجاد می¬شود، این ویروس نوع خاصی از گلبول¬های سفید خون به نام لنفوسیت-های T کمکی، که اصطلاحا CD4+ خوانده می¬شوند، را مورد هدف قرار می¬دهد. از آنجایی که ورود ویروس¬، اولین اتفاق از جمله مراحل اصلی در آلودگی فرد میزبان توسط ویروس¬های غشادار است. این مرحله معمولا به-واسطه گلیکوپروتئین¬های سطح غشا¬ دولایه ویروس انجام می¬شود. اخیرا، هدف قراردادن این پوشش گلیکانی به عنوان یک استراتژی مناسب ضدویروسی پیشنهاد شده¬است. از میان میکروب¬کش¬های ضد ویروس HIV که تاکنون شناخته شده، بازدارنده¬های ورود ویروس، نسبت به سایر میکروب¬کش¬های شناخته شده، تاثیر به¬سزایی در پیشگیری به آلودگی به این ویروس، داشته¬اند. در این بین لکتین¬ها توانایی اتصال اختصاصی و محکم به گلیکان-های غنی از مانوز موجود در سطح غشا ویروس¬ها را دارند و از این طریق قادرند از ورود ویروس به سلول جلوگیری کنند. گریفیتسین متعلق به خانواده¬ای از لکتین¬ها منسوب به جاکالین است که تاثیر بازدارندگی قوی در برابر ویروس¬های غشادار از جمله HIV و SARS از خود نشان داده¬است. در این پژوهش ژن گریفیتسین در دو ناقل بیانی گیاهی به همراه سیگنال پپتید Zera و یک ناقل بیانی باکتریایی همسانه¬سازی شد. سازه¬های ساخته شده جهت تائید نهایی برای توالی¬یابی فرستاده شدند. آنالیز بیان پروتئین در باکتری بر روی ژل SDS PAGE انجام شد که در آن تفکیک باندی مشخصی برای ژن گریفیتسین قابل رویت نبود. همچنین آنالیز بیان ژن گریفیتسین در سطح ترنسکریپتوم با استفاده از Realtime PCR انجام شد و تفاوت میزان رونوشت¬برداری هرکدام از سازه¬ها مشخص شد.
- Abstract
- AIDS is a disease caused by HIV virus. This virus targets a specific type of white blood cells called T helper cells, also referred to as CD4+. Since the entry of the virus is considered the first major step in the infection of host by the enveloped viruses, this step is mediated by the glycoproteins of the virus’s bilayer membrane surface.Recently, targeting of glycan envelope has been proposed as an appropriate antiviral strategy.Among the known HIV antiviral germicides, the virus entry inhibitors, as compared to other known germicides, have a significant impact on preventing the infection with this virus.In the meantime, the lectins are able to bind specifically and tightly to mannose-rich glycans present on the surface of the virus membrane, thereby being able to prevent the virus entry into cells.In this study, we used Greffithsin gene which is belongs to a family of lectins attributed to Jacalyn and has indicated strong inhibitory effect against the enveloped viruses, including HIV and SARS.Greffithsia gene was cloned in two plant expression vectors along with Zera peptide signal and one bacterial expression vector.The constructed structures were sent for sequencing for final approval.Analysis of protein expression in bacteria was carried out on SDS PAGE gel, in which no distinctive band separation was visible for Greffithsia gene.Furthermore, analysis of Greffithsia gene expression was conducted at transcriptome level by Realtime PCR and the difference in the transcription rate was determined for each structure.
