عنوان پایان‌نامه
مطالعه ی اثرات ضدسرطانی متوترکسات در حضور نور و siRNA طراحی شده برعلیهDFF۴۵ در برخی رده های سلولی سرطان سینه
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6190;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73714;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6190;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73714
- تاریخ دفاع
- ۱۴ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- فاطمه کیانی
- استاد راهنما
- شاهرخ صفریان
- چکیده
- با توجه به میزان مرگ و میر ناشی از سرطان پستان در میان زنان، تلاش برای استفاده از روش های جدید درمان با توان اثر بخشی بیشتر ضروری به نظر می رسد. یکی از این روش ها، فتودینامیک درمانی است که در آن یک ماده ی حساس به نور غیرسمی وارد سلول می شود و با دریافت طول موج خاص نور در حضور اکسیژن موجب تولید گونه های اکسیژن فعال و درنهایت مرگ سلول می شود. به علاوه استفاده از RNA مداخله گر (RNAi) روش مؤثری است که می تواند با تداخل در بیان ژن ها اثرات دارو را افزایش دهد. در این مطالعه اثرات کشندگی داروی متوترکسات (MTX) در حضور نور UV و siRNA طراحی شده علیه dff45 مورد بررسی قرار گرفت. DFF45 مهار کننده اندونوکلئاز DFF40 است، خاموش سازی dff45 به وسیله فرآیند RNAi، سبب فعال شدن DFF40 می شود که قادر به راه اندازی مسیر های مرگ سلولی است.در این پژوهش ابتدا توان حیاتی سلول ها در حضور تیمار های مختلف بر رده‌ی سلولی MCF-7، با استفاده از آزمون رنگ سنجی MTT اندازه‌گیری شد. سپس تست فلوسیتومتری جهت تعیین میزان مرگ آپوپتوزی و نکروزی انجام شد و درنهایت به‌منظور بررسی تغییرات بیان ژن‌ها، RNA سلولی استخراج و پس از ساخت cDNA، توسط روش Real-time RT-PCR مورد مطالعه قرار گرفت. نتایج نشان داد تابش UV تأثیری بر افزایش اثرات کشندگی متوترکسات ندارد ولی افزایش حساسیت سلول ها به آپوپتوز در هنگام تیمار با siRNA به نحو چشمگیری افزایش می یابد. زمانی که siRNA همراه با تیمار های MTX، UV و تیمار همزمان MTX + UV استفاده شد، مرگ و میر سلولی به میزان قابل توجهی افزایش یافت که بیشترین میزان مرگ مربوط به دو تیمار UV+siRNA و MTX+UV+siRNA بود. باتوجه به یکسان بودن میزان مرگ در این دو تیمار می توان گفت که استفاده از UV و siRNA به تنهایی، بدون حضور داروی متوترکسات می تواند تا حد زیادی سلول های سرطانی را نابود کند که در این رابطه، باتوجه به تابش موضعی نور می توان اثرات مرتبط با عوارض جانبی دارو را بر سلول های نرمال کاهش داد.
- Abstract
- Given the mortality rate caused by breast cancer among women, it seems necessary to try to use new methods of treatment with higher efficacy. One of these methods is photodynamic therapy in which a photosensitizer and non-toxic material enters the cell, causes the formation of reactive oxygen species and ultimately leads to the cell death. Moreover, the use of RNA interference (RNAi) is an effective method which can increase the effects of drugs by interfering with gene expression. In this study, the cytotoxic effects of methotrexate (MTX) in the presence of UV light and siRNA designed against dff45 were investigated. DFF45 is inhibitor of DFF40 endonuclease. dff45 silencing by RNAi causes the activation of DFF40 which can trigger the cell death pathways.In this research, firstly, the vital capacity of cells in the presence of different treatments on MCF-7 cell line was measured using the colorimetric MTT test. To determine the death of apoptosis and necrosis, flow cytometry was carried out. Finally, to study the changes of genes' expression, cellular RNA was extracted and studied using Real-time RT-PCR method after cDNA synthesis. The results showed that UV irradiation does not increase the cytotoxic effects of methotrexate, but it results in significant augmentation in the sensitivity of cells to apoptosis after siRNA treatment. When siRNA was used together with methotrexate, UV and UV + MTX treatments, the cell death increased significantly. The highest death rate was related to UV + siRNA and UV + MTX + siRNA treatments. Given the same death rates in these two treatments, it can be said that the use of UV and siRNA alone, without methotrexate, can greatly destroy cancer cells. with respect to the local exposure of the cells to light, the impacts associated with the drug side effects on the normal cells can be reduced.
