عنوان پایان‌نامه
جداسازی و همسانه سازی ژن لیمونن سینتاز از رازیانه
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی -بیوتکنولوژی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 872;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73580;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 872;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73580
- تاریخ دفاع
- ۲۴ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- معصومه دعاگو
- استاد راهنما
- حسین رامشینی
- چکیده
- رازیانه (Mill .Foeniculum vulgare) گیاهی است علفی، چند ساله و دیپلوئید (22=x2=n2) از خانواده چتریان (Apiaceae) که در طب سنتی به عنوان ضد نفخ، مدر، دفع کننده سنگ های کلیه و مجاری ادراری، از بین برنده اختلالات گوارشی مثل بیماری ریفلاکس معده استفاده می شود. یکی از مواد موثره اصلی رازیانه لیمونن است که اخیرا توجه زیادی را به علت ارزش تجاری و کاربرد آن در صنایع آرایشی و بهداشتی، شوینده ها، تهیه سوخت های زیستی و همچنین ارزش دارویی و استفاده از آن در درمان سرطان به خود جلب کرده است. از نظر ساختار شیمیایی لیمونن یک مونوترپن تک حلقه ای است که گفته می شود به طور عمده از طریق مسیر MEPبیوسنتز می شود. در این مطالعه بذر، برگ و گل آذین 2 اکوتیپ رازیانه از مزرعه تحقیقاتی پردیس ابوریحان دانشگاه تهران جمع آوری شد. در این پژوهش DNA ژنومی اکوتیپ های فسا و ساری استخراج شد. به دنبال آن با استفاده از آغازگرهای مخصوص طراحی شده، بخشی از توالی ژن لیمونن سینتاز به انداره 1200 جفت باز، با استفاده از تکنیک PCRبرای اولین بار جداسازی شد و در ناقل pGEM-T Easy همسانه سازی گردید. پلاسمیدهای نوترکیب جهت تراریختی به سویه DH5?? باکتری E. coli منتقل شدند. پس از انتخاب همسانه های مثبت در محیط انتخابی، استخراج پلاسمید انجام گردید. پلاسمیدهای نوترکیب با استفاده از روش هضم آنزیمی تایید گردیدند. پس از حصول نتایج توالی یابی و انجام آنالیزهای بیوانفورماتیکی وجود ژن مورد نظر تایید گردید. نتایج نشان داد توالی ژن در دو اکوتیپ بسیار به هم شبیه بوده و تفاوت چندانی نداشتند. از اطلاعات به دست آمده می توان برای بررسی های مولکولی بیشتر مانند توسعه نشانگر برای گزینش ژنوتیپ های مطلوب و تولید ارقام تراریخت به منظور بیش بیان ژن استفاده کرد.
- Abstract
- Fennel (Foeniculum vulgare. Mill) is a herbal plant, perennial and diploid (2n=2x=22), from Apiaceae family which in traditional medicine is known as a carminative, diuretic, eliminator of kidney and urinary tract stones and is used in treatment of gastrointestinal disorders such as gastroesophageal reflux disease. One of the main component of essential oil of fennel is limonene, which is currently attracted a lot of attention because of its commercial value and usage in the cosmetics industry, detergents, biofuels, as well as its medicinal value and its use in the treatment of cancer. The chemical structure of limonene is a single circle molecule which is believed is synthesized mainly through the Mevalonic acid (MVA) pathway . In this research, seeds, leaves and inflorescence of two ecotypes of fennel, Fasa and Sari, were collected. Genomic DNA was extracted from these two ecotypes. Then, using specific designed primers, a fragment of Limonen Synthetase gene with the size of 1200 bp, was isolated using PCR technique and subsequently inserted into pGEM-T Easy vector. The recombinant plasmids were used for transformation of E.coli strain DH5?. After the positive selection of clones in selective medium, plasmid extraction was performed. The insertion of target sequence into plasmids was confirmed by enzymatic digestion. Sequences of the target DNA was obtained and bioinformatics analyses were carried out. The results showed that the sequences of this part of limonene synthase gene were very similar to each other in two ecotypes. The information obtained here can be used to develop molecular markers for selection of favorable genotypes and production of transgenic varieties in which this gene will be over expressed
