عنوان پایان‌نامه
کلونینک بیان خارج سلولی و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم دی آمین اکسیداز در مخمر
- رشته تحصیلی
- بیوتکنولوژی-میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 75168;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 75168
- تاریخ دفاع
- ۲۷ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- طاهره جمشیدنژادتوسرامندانی
- استاد راهنما
- حسن جلیلی, محمد برشان تشنیزی
- چکیده
- آنزیم دی آمین اکسیداز، از جمله آنزیم های پر مصرف در صنعت، در یکی از نقش هایش به عنوان بخش زیستی سامانه زیست حسگر تشخیص هیستامین به کار می رود. هیستامین یکی از انواع آمین های بیوژنیک است که با گذشت زمان در محصولات غذایی و به خصوص صنایع غذایی وابسته به آبزیان تجمع پیدا می کند. تجمع این ترکیب دارای ارتباط معنی داری با بار میکروبی محصول غذایی و زمان تولید تا عرضه ی آن است. همچنین وقتی ترکیباتی از این دست بیش از مقدار مشخصی مصرف می شوند دارای تاثیرات قابل توجهی بر سلامت انسان هستند. بنابراین تشخیص مقادیر موجود از هیستامین در محصولات غذایی، به منظور تعیین میزان تازگی محصولات و همچنین ممانعت از حساسیت زایی آنها بسیار حائز اهمیت است. البته از آنجا که آمین های بیوژنیک ترکیباتی فرار، با وزن مولکولی پایین و فاقد کروموفور ذاتی هستند آنالیز های تشخیصی در مورد آنها با محدودیت های فراوان روبرو است. در بین انواع روش های تشخیصی که عمدتا بر پایه کروماتوگرافی هستند، روش آنزیمی دقیق ترین، ارزان ترین و سریع ترین روش است که بدون نیاز به نیروی متخصصص و پیش فراوری نمونه ها می باشد و امکان استفاده در جا را در فرایند تولید تا مصرف برای کاربر ایجاد می کند. با توجه به اندازه ی بزرگ آنزیم دی آمین اکسیداز (حدود 70 کیلو دالتون) و وجود دو کوفاکتور (مس و توپاکوئینون) در آن، تولید نوترکیب این پروتئین با چالش های جدی روبرو است. مخمر P. pastoris با توجه به برتری هایی که در خصوص بیان پروتئین هایی از این دست دارد به عنوان میزبان بیانی در نظر گرفته شده است. در پایان مقادیر قابل توجه آنزیم که منتج از شرایط مناسب بیان در میزبان مخمری است، تعیین خصوصیات آنزیم و پیش زمینه ی مطالعات بیشتر بر روی آن را امکان پذیر ساخت.
- Abstract
- Abstract: Copper-containing amine oxidases (EC 1.4.3.22) catalyze the oxidative deamination of biogenic amines (BAs) such as histamine. The major application of this enzyme is the analysis of histamine in food industry. Determination of histamine in foods has two reasons: the first is their liability in health problems; the second is the possibility of using them as hygienic food quality indicator. The enzymatic method to quantify histamine has been shown to be an easy، valid، sensitive and rapid technique. Since the progression in biotechnology، it is convenient now to express Diamine Oxidase (DAO) gene in eukaryotic host for the quantification of histamine in food. The synthesized cDNA coding for Cicer arietinum diamine oxidase gene was subcloned into pPINK-HC vector and secretory expressed using PichiaPINK™ expression strain Pichia pastoris under control of the inducible AOX1 promoter. Expressed diamine oxidase has been characterized from analytical point of view. Keywords: Diamine Oxidase، Pichia pastoris، Molecular cloning، Yeast، Gene expression
