عنوان پایان‌نامه
بررسی آنزیم گیتیناز خارج سلولی دربرخی جدایه های Trihoderma spp و انتخاب ایزوله های برتر در کنترل بیو لوژیک نماتد مولد گره Melodogyne javanica
- رشته تحصیلی
- مهندسی‌کشاورزی-بیماری‌شناسی‌گیاهی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 43653;کتابخانه پردیس ابوریحان شماره ثبت: 259
- تاریخ دفاع
- ۲۰ اسفند ۱۳۸۷
- دانشجو
- مریم عبدی
- استاد راهنما
- نوازاله صاحبانی
- چکیده
- در این تحقیق بیست جدایه مختلف از تریکودرما که متعلق به هشت گونه ی متفاوت از این جنس بودند به عنوان عوامل بیوکنترل نماتد مولد گره ریشه مورد آزمایش قرار گرفتند. این جدایه ها از نظر میزان فعالیت آنزیم کیتیناز مورد ارزیابی قرار گرفتند. ابتدا همه ی این جدایه ها در محیط کشت حاوی کیتین کلوئیدال کشت داده شده و از نظر میزان فعالیت آنزیم کیتیناز مقایسه شدند. در این آزمایش سه جدایه 125، 126 و 10 Bi ، از Trichoderma harzianum به ترتیب بیشترین میزان فعالیت آنزیم را نشان دادند و جدایه های T. parceramosum ، T. viride و T. saturnisporum نیز دارای کمترین میزان فعالیت آنزیم بودند. جدایه T. virens 124 نیز در زمره جدایه های برتر این آزمایش شناخته شد. در مرحله ی بعد ده جدایه ای که در آزمایش اول نتایج بهتری نشان داده بودند جهت بررسی فعالیت آنزیم کیتیناز در محیط کشت حاوی تخم Meloidogyne javanica انتخاب شدند. در این آزمایش نیز جدایه شماره 119 از گونه T. harzianum دارای بیشترین میزان فعالیت آنزیم کیتیناز بود. در این آزمایش کمترین میزان فعالیت آنزیم نیز مربوط به جدایه T. harzianum 4c1 بود. مشاهده شد که جدایه T. harzianum 126 که در محیط کشت حاوی کیتین کلوئیدال بسیار موفق عمل کرده بود در محیط کشت حاوی تخم نماتد بسیار ضعیف عمل کرد. همچنین تأثیر مستقیم این بیست جدایه تریکودرما بر تخم های نماتد در آزمایشگاه مورد مقایسه قرار گرفت. این تقابل بین قارچ و تخم نماتد در محیطی in-vitro در سطح لام های شیشه ای مورد ارزیابی قرار گرفت و مشاهده شد همه ی جدایه های فوق در پارازیته کردن تخم های نماتد موفق ظاهر شده اند اما بیشترین درصد تخم های پارازیته شده مربوط به جدایه های 125 ، 126 و 10 Bi از گونه ی T. harzianum بود. کمترین درصد تخم های پارازیته شده نیز حاصل عمل جدایه های T. harzianum 112 ، T. parceramosum ، T. hamatum، T. longibrachiatum 103 ، T. viride، T. saturnisporum و T. harzianum TSH2 بود. میزان رشد پرگنه ای جدایه های فوق در محیط کشت آب آگار حاوی کیتین نیز مورد ارزیابی قرار گرفت و مشاهده شد که تقریباً بین میزان رشد پرگنه ای جدایه ها و میزان آنزیم کیتیناز مترشحه از آنها ارتباط مستقیمی وجود دارد. در آزمایشات گلخانه ای شش جدایه از میان قوی ترین و ضعیف ترین جدایه ها ( از نظر میزان فعالیت آنزیم کیتیناز) مورد بررسی قرار گرفتند. در این آزمایشات نشاهای گوجه فرنگی در خاک مایه کوبی شده توسط این ماسه و آرد ذرت آلوده به این جدایه ها کاشته شده و توسط تخم های نماتد مایه زنی شدند و وزن تر اندام های هوایی و ریشه، تعداد گال، تعداد Egg mass و تعداد تخم درون توده های تخم بررسی شدند و مشاهده شد جدایه هایی که از نظر میزان فعالیت آنزیم کیتیناز در شرایط آزمایشگاهی بهتر عمل کرده بودند، در شرایط گلخانه نیز در کنترل نماتد مولد گره ریشه از موفقیت بیشتری برخوردار بودند. به طور کلی نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد که گونه ی T. harzianum در کنترل بیولوژیک نماتد مولد گره ریشه موفق تر از سایر گونه ها بوده و نیز بین میزان کنترل بیولوژیک نماتد مولد گره ریشه توسط جدایه های تریکودرما و میزان تولید آنزیم کیتیناز توسط این جدایه ها ارتباط مستقیمی وجود دارد. بررسی های تکمیلی بر روی این جدایه ها از نظر تولید سایر متابولیت ها (مثل آنزیم پروتئاز) جهت گزینش بهترین جدایه ها به منظور تکثیر و استفاده ی کلان در شرایط مزرعه ای با هدف کنترل بیولوژیک نماتد مولد گره ریشه و نیز سایر پاتوژن های خاکزاد گیاهی بسیار ضروری به نظر می رسد.
- Abstract
- Abstract In this study 20 isolates of Trichoderma belonged to 8 species of this genus were compared based on extracellular chitinase production and biological control of root knot nematode ( Meloidogyne javanica) in laboratory and greenhouse experiments. Firstly these isolates were cultured in liquid culture medium containing colloidal chitin as sole carbon source for chitinase induction and then the chitinase activity of each isolate was evaluated. According to results T. harzianum 125, T. harzianum 126 and T. harzianum 10Bi showed maximum rate of enzyme activity and isolates of T. parceramosum, T. viride and T. saturnisporum showed minimum rate. In other experiment, 10 isolates with maximum and minimum rate of enzyme activities in above experiment were cultured in liquid culture medium containing nematode ( Meloidogyne javanica) eggs as sole carbon source and chitinase activity was evaluated for each isolate. According to results T. harzianum 119 showed maximum rate of enzyme activity and T. harzianum 4c1 showed minimum rate. Results also showed that T. harzianum 126 that showed maximum rate of enzyme activity in culture medium containing colloidal chitin, showed minimum rate of enzyme activity in this experiment. Direct parasitism of all 20 isolates on nematode eggs were compared on glass slide in petri plates. Results in this experiment also showed that T. harzianum 125, 126 and 10Bi parasitized nematode eggs significantly higher than others and minimum percent of them was showed by T. harzianum 112, T. parceramosum, T. hamatum, T. longibrachiatum, T. viride, T. saturnisporum and T. harzianum TSH2 respectively. In greenhouse experiment, biological control potential of 6 isolates with maximum and minimum rate of enzyme activity mentioned above, against nematode was compared and number of gall, number of egg mass, number of eggs in individual egg mass and fresh weight of root and aerial portion were evaluated respectively. Results showed that T. harzianum 125, 126 and 10Bi that were showed maximum rate of enzyme activity in culture medium containing colloidal chitin and nematode egg, significantly reduced nematode infection and other measured parameters compared to control and other isolates. Results also showed direct correlation between chitinase secretion, nematode eggs parasitism and reduction of nematode infection. Based on the results, we can suggest that among of 8 species of Trichoderma used in this study, T. harzianum with high ability of extracellular chitinase secretion and its biological potential against root knot nematode, was the best candidate for studding other parameters related to nematode management such as protease and other enzymes and metabolite secretion.
