عنوان پایان‌نامه
شناسایی آنا پلاسما فاگوسیتوفیلوم/آناپلاسما مارجیناتوم در شترهای یک کوهانه استان بوشهر
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 47 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 72927;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 47 ارشد;کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 47 ارشد;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 72927;کت
- تاریخ دفاع
- ۰۶ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- زهرا مرادی
- استاد راهنما
- الهه ابراهیم زاده آبکوه
- چکیده
- آناپلاسموز به وسیله اجرام داخل سلولی اجباری، گرم منفی و متعلق به خانواده آناپلاسماتاسه آ ایجاد و توسط کنه ها و تعداد دیگری از بندپایان منتقل می شود. جنس آناپلاسما دارای گونه های آناپلاسما فاگوسیتوفیلوم، آناپلاسما مارجیناله، آناپلاسما سنتراله، آناپلاسما بوویس، آناپلاسما اوویس و آناپلاسما پلاتیس می باشد که در این میان دو گونه آناپلاسما مارجیناله و آناپلاسما فاگوسیتوفیلوم دارای اهمیت زیادی می باشند و می توانند باعث آلودگی شتر می شوند. این اجرام باعث ایجاد عفونت در طیف وسیعی از حیوانات و از جمله انسان می شوند و با نشانه هایی مانند تب، کم خونی و مرگ و میر همراه می باشد. آناپلاسموز به سه روش بررسی ریخت شناسی، آزمون سرولوژی و آزمایش های مولکولی تشخیص داده می شود. بررسی گسترش های خون رنگ آمیزی شده به روش گیمسا به عنوان رایج ترین روش تشخیصی آناپلاسموز مطرح است اما به علت میزان پایین ریکتزمیا در خون حیوانات حامل، این روش برای تشخیص حیواناتی که مبتلا به عفونت پایدار هستند مناسب نمی باشد. روش های سرولوژی نیز به دلیل فقدان حساسیت و ویژگی قابل اعتماد در مقایسه با آزمون های مولکولی و واکنش متقاطع بین گونه ای دارای قابلیت تشخیص و تفریق مناسب نمی باشند. واکنش زنجیره ای پلی مراز به عنوان روش استاندارد طلایی برای تشخیص آناپلاسموز مطرح می باشد. در این مطالعه، 139 نمونه خون از 139 نفر شتر یک کوهانه در استان بوشهر جمع آوری شد. برای بررسی ریخت شناسی، از همه نمونه ها گسترش خون نازک تهیه و به روش گیمسا رنگ آمیزی شد. در بررسی ریخت شناسی 139 گسترش تهیه شده از خون، 27 نمونه از نظر آلودگی به آناپلاسما مثبت ارزیابی شد که 21 نمونه مشکوک به آناپلاسما مارجیناله، یک نمونه آناپلاسما مارجیناله مثبت و 27 نمونه مشکوک به آناپلاسما فاگوسیتوفیلوم ارزیابی شد. پس از انجام آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز با پرایمر بتا اکتین، برای ارزیابی DNA استخراج شده ، DNA استخراجی از نمونه های خونی با جفت آغازگری که قطعه 781 جفت بازی از ژن 16S rRNA آناپلاسما را تکثیر می کرد تکثیر شد. در مرحله بعد آزمون Nested-PCR حضور باند 543 جفت بازی را نشان داد. نتایج آزمون PCR اولیه بر اساس ژن 16S rRNA نشان داد که 80 نمونه از لحاظ وجود آناپلاسما مثبت می باشند. آزمون Nested-PCR بر اساس ژن 16S rRNA روی محصول PCR اولیه، 134 نمونه را مثبت تشخیص داد. نتایج تعیین توالی، حضور آناپلاسما فاگوسیتوفیلوم، آناپلاسما مارجیناله و گونه نزدیک به آناپلاسما پلاتیس در خون شترهای مورد مطالعه را نشان داد. این مطالعه، اولین تشخیص مولکولی آناپلاسموز شتر در ایران می باشد.
- Abstract
- Anaplasmosis is caused by an obligate intracellular, gram negative germs belong to family Anaplasmatacea that can be transmitted by ticks and other arthropods. The Anaplasma genus compromised A.phagocytophilum, A.marginale, A.centrale, A.bovis, A.ovis and A.platys. A.marginale and A.phagocytophilum have great importance and can make infection in camels. These germs cause infection in a wide range of animals and humans and is associated with symptoms such as fever, anemia and mortality. Anaplasmosis has been diagnosed using morphological, serological and molecular methods. Giemsa–stained smears is the most common methods to diagnosis of Anaplasma spp, but it isn’t an appropriate methods due to the low level of rickettsemia in carrier hosts. Serological methods due to cross-reactivity between species has the poor ability to recognize and differentiate species. Polymerase chain reaction as the gold standard for diagnosis of Anaplasma spp. is raised. In the present study, 139 blood samples from dromedary camels were collected in Bushehr province. In order to morphological evaluation, smears were prepared and stained with giemsa. 27 out of the total 139 blood samples were suspected for the presence of Anaplasma by morphological study, which A.marginale was suspected in 21 and A.phagocytophilum in 27. One sample were certainly positive for the presence of A.marginale by using morphological methods. The successful extraction of DNA was controlled using common primers pairs derived from ? actin gene of the camelid. The extracted DNA was amplified using two pairs of primers were derived from the 16S rRNA gene of Anaplasma in primary PCR reaction, the amplicon was 781 bp in size. The Nested-PCR product was detected as 543 bp in size. Primary PCR and Nested PCR based on 16S rRNA have been detected positive, in 80 and 134 for the presence of Anaplasma respectively. Sequencing showed A. phagocytophilum, A.marginale and a species close to A.platys. This is the first molecular characterization of Anaplasma in the dromedary camel in Iran.
