عنوان پایان‌نامه
بررسی بیان گیرنده PAR۲ و ارتباط آن با بیان و عملکرد پروتئینCatenin - بتا در سلول های انتخابی سرطان کولون
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6205;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73898;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6205;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73898
- تاریخ دفاع
- ۲۸ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- مژده سوری
- استاد راهنما
- نسرین معتمد, سیدمحمود عرب نجفی
- چکیده
- پروتئین ?-catenin در دو فرایند مهم سلولی شامل اتصالات سلولی و مسیر پیام رسانی Wnt نقش مهمی بازی می کند. مسیر Wnt نقش بسیار مهمی در فرایندهای سلولی مانند تکثیر، تمایز، هومئوستازی بافت ها در بالغین و نمو جنینی دارد. فعالیت غیر طبیعی این مسیر در انواع مختلفی از سرطان ها مانند سرطان کولون دیده شده است.در حضور گلیکوپروتئین Wnt مسیر پیام رسانی Wnt فعال می شود و در نتیجه پروتئین ?-catenin سیتوپلاسمی پایدار می شود. ?-catenin پایدار شده می تواند وارد هسته سلول شود و به همراه فاکتورهای رونویسی Tcf/LEF بیان ژن های هدف خود را تنظیم کند. از این رو به هم خوردن تنظیمات این مسیر در بسیاری از سرطان ها مانند سرطان کولون دیده می شود.لیگاندهایWnt از طریق گیرنده های Frizzled پیام را به داخل سلول انتقال می دهند. این گیرنده ها از نظر ساختاری بسیار شبیه گیرنده های متصل شونده به G پروتئین های هتروترایمتریک می باشند. بنابراین نقش G پروتئین ها در کنترل مسیر پیام رسانی Wnt مورد توجه قرار گرفته است. هدف در این پروژه تحقیقاتی این است که دریابیم سلول های سرطانی کولون به چه میزان به مسیر پیام رسانی Gaq وابسته هستند بدین منظور بیان گیرنده PAR-2 که یکی از گیرنده های فعال کننده Gaq است در سلول های انتخابی کولون مورد اندازه گیری قرار گرفت و سپس ارتباط آن با بیان و فعالیت ?-catenin در این سلول ها مورد توجه قرار گرفت .در این پایان نامه برای مشاهده اثرفعال کننده های G?qبر پایداری پروتئین ?-cateninاز آزمایشاتRT-PCR ، ایمونوفلورسانس استفاده شده است. در این مطالعه سلول های HT29 و SW480 را با هورمون تریپسین که یکی از فعال کننده های G?q می باشد تحت تیمار قرار گرفتند. نتایج ما نشان داد گیرنده PAR2در هر دو رده سلولی بیان می شود بنابراین متوجه شدیم که در این سلول ها مسیر G?q با مسیر پیام رسانی Wnt ارتباط دارد. آزمایشات ایمونوفلورسانس ما چنین فرضیه ای را مورد تایید قرار داد که در طی آن ها نشان دادیم که آگونیست تریپسین موجب افزایش مقدار پروتئین ?-catenin در غشای سلول های HT29 و SW480 می گردد.
- Abstract
- ?-catenin protein plays an important role in two important cellular processes, namely cell junction and Wnt signaling pathway. Wnt pathway plays an important role in cellular processes such as proliferation, differentiation, tissue homeostasis in adults and fetal development. Abnormal activities of this pathway have been seen in a variety of cancers such as the colon cancer. In the presence of Wnt glycoprotein, the Wnt signaling pathway is activated, resulting in the stability of the cytoplasmic ?-catenin protein. The stabilized ?-catenin can enter the cell nucleus, and with the transcription factors Tcf / LEF regulates its target genes. Hence, the disruption of this pathway can be seen in many cancers such as colon cancer. Wnt ligands carry messages into the cell through Frizzled receptors. These receptors are structurally very similar to receptors that are bind to Heterotrimetric G proteins. Therefore, the role of G proteins in controlling Wnt signaling pathway is considered. Th purpose of this research project is to understand to what extent the colon cancer cells are dependent on Gaq signaling pathway. To this end, the PAR-2 which is one of the activator receptors of Gaq, was measured in the colon selected cells, and then its relationship with ?-catenin expression and activity in these cells was studied. In this thesis, in order to examine the activation effects of G?q receptors on the ?-catenin protein stability, the tests of RT-PCR, and immunofluorescence were used. In this study, HT29 and SW480 cells were treated with trypsin hormone that is one of the G?q activators. Our results showed that PAR2 receptor is expressed in both cell lines. Thus, we found that in these cells, the G?q pathway has a relationship with Wnt signaling pathway. The immunofluorescence experiments confirmed this hypothesis, in which it is shown that the agonist trypsin increased the amount of ?-catenin protein in HT29 and SW480 cells membrane.
