عنوان پایان‌نامه
” فعالیت حشره‌کشی جدایه تولیدکننده توکسین Fit از باکتری Pseudomonas Fluorescens روی بید کلم( Plutella xylostella (Lep.:Plutellidae
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی-حشره شناسی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6810;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73705;کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6810;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 73705
- تاریخ دفاع
- ۲۶ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- فائزه افسری
- استاد راهنما
- مسعود احمدزاده, رضا طلایی حسنلویی
- چکیده
- بید کلم Plutella xylostella (Lep.:Plutellidae) یک آفت جدی گیاهان خانواده چلیپائیان در بسیاری از مناطق جهان می‌باشد. با توجه به این‌که گیاهان این خانواده اغلب مصرف تازه¬خوری هم دارند، استفاده از عوامل کنترل بیولوژیک برای کنترل آفات روی این گیاهان اهمیت دو چندان پیدا می‌کند. باکتریPseudomonas fluorescens یک باکتری گرم منفی، شیموهتروتروف وهوازی می‌باشد که در این پژوهش فعالیت حشره‌کشی سویه‌ای از آن با استفاده از زیست سنجی روی بید کلم به دو روش تماسی و گوارشی بررسی شد و LC50 و LT50 آن به روش خوراکی روی لارو سن دوم بید کلم محاسبه شد. همچنین اثر کشندگی B. thuringiensis نیز روی جمعیت بید کلم مورد استفاده در آزمایش بررسی شد. در مرحله بعد، ژن تولید کننده توکسین Fit (fitD) در باکتری P. fluorescens ردیابی شد. ابتدا، سوسپانسیون باکتری P. fluorescens در غلظت¬های متوالی 104 تا 109 سلول بر میلی لیتر تهیه گردید. در روش گوارشی، برگ گیاه کلم چینی به مدت چند ثانیه درون سوسپانسیون غوطه ور گردید و پس از خشک شدن آب اضافی آن، در اختیار لاروها قرار داده شد. در روش تماسی، ابتدا لاروها درون سوسپانسیون با غلظت های متوالی 106 تا 109 سلول بر میلی لیتر باکتری غوطه ور گردیدند و سپس روی دیسک های برگی سالم قرار گرفتند. در هر دو آزمایش تعداد لاروهای مرده به مدت 72 ساعت ثبت گردید. به منظور تعیین زمان کشندگی باکتری P. fluorescens ، غلظت 108 سلول بر میلی لیتر به روش گوارشی مورد آزمون قرار گرفت. تعداد لاروهای مرده هر 12 ساعت یکبار تا سه روز ثبت گردید. زیست سنجی توسط باکتری B. thuringiensis به روش گوارشی با غلظت های متوالی 102×3 تا 106×3 اسپور بر میلی لیتر روی لارو سن دوم بید کلم انجام شد. برای ردیابی ژن fitD نیز DNA کروموزومی باکتری به روش جوشاندن استخراج شده و با استفاده از دو آغازگر اختصاصی 7527-F و 8754-R تکثیر گردید. میزان LC50 محاسبه شده باکتری P. fluorescens 107×7/2 سلول باکتری در میلی لیتر بوده است و میزان LT50 آن در غلظت108 سلول بر میلی لیتر 13/41 ساعت محاسبه شد. ارزیابی محصولات حاصل از تکثیر قطعه ای از DNA باکتری در واکنش زنجیره ای پلیمراز و باند موجود در ژل، نشان می داد که قطعه DNA به طول تقریبی 1250 جفت باز از دسته ژنی fit مسئول تولید توکسین حشره کش Fit تکثیر شد.بر این اساس باکتری P. fluorescens سویه UTPF5 مورد استفاده در این تحقیق واجد ژن fitD می باشد. نتایج حاصل از این تحقیق منجر به معرفی سویه UTPF5 باکتری P. fluorescens به عنوان یک سویه با فعالیت حشره‌کشی روی لاروهای بال‌پولک داران شد.
- Abstract
- Diamond back moth Plutella xylostella (Lep.: Plutellidae) is being assumed as a serious pest of Brassicaceae in most areas. Moreover, vegetables of this family are usually eaten uncooked and application of pesticides on these vegetables should happen cautiously. Pseudomonas fluorescens is a Gram-negative, chemoheterotrophic and aerobic bacterium that oral and contact insecticidal activity of one of its strains was evaluated on larva of P. xylostella through a Chinese cabbage leaf dip method in this research and also LC50 and LT50 of the bacterium was determined. LC50 and LT50 of a product of Bacillus thuringiensis (Ruin 2) on larva of P. xylostella were determined. In next step, fitD gene in P. fluorescens was sequenced. Firstly, the suspension of P. fluorescens in consecutive concentrations of 104 to 109 cell/ml were prepared. The leaves of Chinese cabbage dip in to suspension for a few seconds and after drying 15 second instar larvae fed on them. For contact insecticidal activity, 15 second instar larvae were dip in suspension and then placed on natural leaves. Number of death larva were counted until 3 days. To determining lethal time one concentration (108 cell/ml) was selected and bioassay took place through oral way. Number of death larva were counted every 12 hours until 3 days. Oral bioassay of B. thuringiensis followed by 3×102 to 3×106 cell/ml consecutive concentrations. To sequencing fitD gene the genomic DNA were extracted by boiling method and were replicated by specific primers 7527-F and 8754-R. Calculated LC50 for P. fluorescens was 2.7×107 cell/ml and calculated LT50 was 41.13 hours in 108 cell/ml concentration. Evaluating polymerase chain reaction product have shown that DNA pieces with length of 1250 base pair was replicated. Hence, UTPF5 strain of P. fluorescens include fitD gene. Results of this research introduced P. fluorescens (strain UTPF5) as a bacterium with insecticidal activity on lepidopteran. Keywords: microbial control, Plutella xylostella, Pseudomonas fluorescens, crucifers
