عنوان پایان‌نامه
بررسی وجود هلیکوباکتر پیلوری در واکوئول های جدا شده از مخمر کاندیدا
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی - میکروبیولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6266;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 75148;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6266;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 75148
- تاریخ دفاع
- ۱۹ بهمن ۱۳۹۴
- دانشجو
- مهسا شفیعی
- استاد راهنما
- فریده سیاوشی
- چکیده
- بسیاری از باکتری ها از جمله باکتری های بیماری زا در شرایط استرس زا در داخل میکرو ارگانیسم یوکاریوتی باقی می مانند.واکوئول سلول های یوکاریوتی برای استقرار باکتری های داخل سلولی،زیستگاه منحصر به فردی ایجاد می نماید.اگرچه جزئیات این استقرار داخل سلولی عمدتا به دلیل غیر قابل کشت بودن باکتری ها ناشناخته است.مطالعات اخیر نیز نشان می دهدHelicobacter pylori یک باکتری درون سلولی اختیاری است و ار آن جایی که راه انتقال آن ناشناخته است این فرضیه مطرح می گردد که شاید مخمر بعنوان یک مخزن محیطی در انتقال وبقا باکتری نقش داشته باشد.حضور داخل سلولی H.pylori در داخل واکوئول های قارچی با استفاده از میکروسکوپ نوری وفلوئورسنت و شناسایی ژن های اختصاصیH.pylori نشان داده شده است.هدف از این مطالعه جداسازی واکوئول از مخمر های گوارشی Candida برای اینکه نشان دهیم اجسام شبه باکتریایی در داخل واکوئول های استخراج شده نیز حضور دارند.به منظور جداسازی واکوئول ، یک مخمر گوارشی که در محیط YPD تلقیح شده بود را در بافر شست و شو معلق گردانیده وبرای 30 دقیقه در حمام آب گرم قرار می دهیم.پس از جمع آوری سلول های مخمر بوسیله سانتریفوژ،آنها را در بافر اسفروپلاست معلق می نماییم.دیواره سلول های مخمر بوسیله آنزیم لیتیکاز حذف گردید.دی اتیل آمینو اتیل دکستران باعث لیز غشای مخمر و آزاد سازی واکوئول ها گردید.واکوئول ها به وسیله گرادیان فایکول جمع آوری گردید و ابتدا با میکروسکوپ نوری و سپس با مارکرهای فلوئورسنت مشاهده گردید.مشاهدات میکروسکوپیک اجسام شبه باکتریایی را در داخل واکوئول جدا سازی شده نیز نشان داد وPCR ژنH.pylori 16SrRNA برای واکوئول های جداسازی شده ماهیت باکتریایی این اجسام را نشان دادتد.تمامی این یافته ها نشان می دهد که واکوئول زیستگاه حفاظتی وتغذیه ای مناسب برای باکتری های داخل سلولی است.
- Abstract
- Many bacteria, including pathogenic bacteria in stressful situations within eukaryotic microorganisms remain. Vacuoles of eukaryotic cells for intracellular bacterial colonization, created a unique habitat However details of this intracellular existence is not known due to non culturability of endobacteria. Recent studies also show that Helicobacter pylori is a facultative intracellular bacteria and of transmission is unknown where it is hypothesized that perhaps yeast as an environmental reservoir survival transfer bacteria have a role. The presence of intracellular vacuoles H.pylori in yeast using an optical microscope and identify specific genes H.pylori has been shown. The aim of this study was to isolate yeast vacuole of gastric Candida to show the existence of intravacuolar bacterial-like bodies inside the isolated vacuoles. For isolation of vacuole, one gastric yeast was inoculated in YPD suspended in wash buffer and for 30 minutes in a warm bath, put. After collecting the yeast cells by centrifugation, they are suspended in the buffer spheroplast. Cell wall yeast were lysed by enzyme lyticase. Diethyl amino ethyl dextran causes membrane lysis and the release of yeast vacuole. Vacuoles were collected by ficoll gradient, and then with optical microscope and the fluorescent markers were observed. Microscopic observations bacterial like bodies inside isolated vacuoles showed. PCR gene16S rRNA H.pylori for isolated vacuoles represent bacterial nature of these objects. All these findings suggest that the vacuoles nutrition and habitat suitable for intracellular bacteria.
