عنوان پایان‌نامه
بررسی میزان ترمیم شکستگی رشته های DNA پس از تابش پرتو های یونیزان در دودمان سلولی سرطان پروستات انسانی DU۱۴۵در دو مدل کشت تک لایه و اسفروئید با روش Comet Assay
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 36237;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10301ب
- تاریخ دفاع
- ۲۷ آبان ۱۳۸۶
- دانشجو
- مجید ایزدی
- استاد راهنما
- بهرام گلیائی
- چکیده
- سرطان پروستات دومین عامل مرگ سرطانی در مردان است، که این امر اهمیت بررسی و مطالعه بیشتر روی روش های درمانی این سرطان را مشخص می سازد. از سرطان پروستات چندین دودمان سلولی مختلف جدا شده است. از جمله دودمان های سلولی سرطان پروستات دودمان سلولی DU145 می باشد. از خصوصیات این دودمان سلولی این است که می توان آن را به دو صورت تک لایه و اسفروئید کشت داد. اسفروئیدها علاوه بر شباهت بسیار زیادی که به تومور in vivo دارند به مراتب ساده تر و کم هزینه تر از تومورهایی هستند که به طور القائی برای تحقیقات مختلف در جانوران ایجاد می شوند. مطالعات متعدد نشان داده است که مقاومت پرتوی سلول های اسفروئید نسبت به پرتوهای یونیزان بیشتر از کشت تک لایه می باشد. اما روند ترمیم آسیب های DNA در این دو مدل کشت کمتر مورد بررسی قرار گرفته است. آزمون کامت یک روش نسبتاً جدید با حساسیت بالا است که برای بررسی آپوپتوز، آسیب های DNA و روند ترمیم آن مورد استفاده قرار می گیرد. در این پایان نامه با استفاده از آزمون کامت آسیب های اولیه و همچنین روند ترمیم در دو مدل کشت تک لایه و اسفروئید از دودمان سلولی DU145 پس از پرتودهی با دوزهای 1، 3 و Gy5 مورد بررسی قرار گرفته است. که نتایج بدست آمده نشان داد با اینکه آسیب های اولیه DNA در مدل کشت اسفروئید کمتر از مدل کشت تک لایه است اما روند ترمیم در سلول های تک لایه در دوز پرتویی Gy5 به طور معنا داری بیشتر از سلول های اسفروئید می باشد. برای مقایسه دقیق تر روند ترمیم ?M10 کورستین 30 دقیقه قبل از پرتودهی به محیط سلول ها اضافه شد. غلظت های پائین کورستین ( ?M8/3 = IC50) باعث مهار آنزیم PI-3Kinase می شود. آزمایشات ما نشان داد که تیمار این سلول ها با کورستین باعث افزایش حساسیت پرتویی در دو مدل کشت تک لایه و اسفروئید می شود، که این اثر بر روی سلول های کشت اسفروئید بارزتر است. بررسی روند ترمیم در حضور و عدم حضور کورستین نیز نشان داد که ترمیم سلول های کشت اسفروئید پس از Gy5 پرتودهی در حضور کورستین به طور معنا داری کمتر از نمونه بدون کورستین است. نتایج حاصل از تیمار با کورستین این نظریه را که سلولهای کشت اسفروئید در روند ترمیم آسیب هایDNA دارای نقص هایی نسبت به کشت تک لایه می باشند را تقویت می کند.
- Abstract
- Prostatic cancer is the second reason of men death. This event reveals the value of study on cancer therapy methods. One of the most important prostate cancer cell lines is DU145 cell line. The characteristic of this cell line is that this cell line could be cultured in monolayer and spheroid. Relative to induction tumors in animal’s body the spheroids are similar to in vivo tumors. Spheroid models are easier and cheaper for tumor study. Previous studies shown that relative to monolayer culture the spheroids are resistant to radiation but processing of DNA damage repair in these tow types of culture is not study much. Comet assay is the new method with high sensitivity which is fast and cheap. Comet assay method use in different fields like the study of DNA damage and repair. To study the DNA damage and repair by 0, 1, 3 and 5 Gy of radiation on monolayer and spheroid models we used comet assay method. The result of this study shows that DNA damage in spheroids is lower than monolayer, but the repair processing of monolayer cells in 5 Gy radiation dose is significantly more than spheroid cells. To more study of this event, 10 ?M quercetin added to cells culture before 30min of radiation. Low concentration of quercetin (IC50 = 3.8 ?M ) inhibit Phosphatidylinositol 3-kinase (PI-3 Kinase) enzyme. Our study shown that the effects of quercetin in spheroid cells are more than monolayer cells. The repair processing of DU145 cells with quercetin treatment and without quercetin treatment show that the repair of spheroid cells after 5 Gy radiation with quercetin is significantly lower than cells without quercetin. The result of cells treatment with quercetin shows that spheroid cells are defected in DNA damage repair.
