عنوان پایان‌نامه
بهینه سازی روش تخلیص آنتی بیوتیک پرسیمایسین
- رشته تحصیلی
- زیست فناوری (بیوتکنولوژی) - میکروبی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6234;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 74271;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6234;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 74271
- تاریخ دفاع
- ۲۷ خرداد ۱۳۹۴
- دانشجو
- فرزانه رحمتی
- استاد راهنما
- جواد حامدی, فاطمه محمدی پناه
- چکیده
- پرسی پپتید اولین ترکیب زیستی پپتیدی با خاصیت ضد باکتریایی ایرانی است که توسط سویه Streptomyces zagrosensis UTMC 1154 تولید می شود. تخلیص این متابولیت پپتیدی دارای اهمیت ویژه ای بوده و طراحی روش هایی در زمینه بهبود شرایط استخراج بسیار مهم و اساسی می باشد. در نهایت افزایش مقدار کمی و بهبود جداسازی این متابولیت از محیط تخمیر از طریق بهینه سازی شرایط استخراج آن، امکان پژوهش ها و تحقیقات بیشتر در زمینه کاربرد های بالینی این متابولیت پپتیدی را فراهم می کند.در این مطالعه، تخمیر در حجم بالا به میزان 130 لیتر با استفاده از فرمانتور و فلاسک صورت گرفت. پس از تخمیر، استخراج مایع تخمیر با حلال اتیل استات انجام شد و 74/20 گرم عصاره خام به دست آمد. عصاره حاصل تحت روش های مختلف کروماتوگرافی از جمله ستون های سیلیکاژل، سفادکسLH-20 و دیول قرار گرفت. در نهایت ترکیبات خالص و نیمه خالص به دست آمده در دمای ?C 20- نگهداری شدند. همچنین به منظور افزایش درصد بازیابی پرسی پپتید از محیط تخمیر طی فرایند استخراج، روش های مختلف استخراجی از جمله استخراج با حلال های مختلف، استخراج به روش SPE با استفاده از رزین های سیلیکا و C-18، و استفاده از جاذب های مختلف جهت استخراج و جذب پرسی پپتید از درون محیط تخمیر، مورد آزمون قرار گرفتند.در روش استخراج با کمک جاذب های مختلف، نشان داده شد که در مقایسه با روش کنترل (استخراج با بوتانول)، رزین آمبرلیت XAD-16 با بالاترین درصد بازیابی محاسبه شده (46/91%)، به عنوان رزین منتخب جهت به کار گیری در روش استخراج درجا و سپس بهینه سازی این روش، از نظر متغیر های غلظت رزین، زمان افزودن رزین به محیط تخمیر و نیز طول دوره تخمیر، به روش طراحی آزمایش فاکتوریال کامل در دو سطح، مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از تحلیل واریانس (ANOVA) متغیر های غلظت رزین و برهم کنش بین غلظت رزین با زمان افزودن رزین به محیط تخمیر، به عنوان عوامل مهم و تاثیر گذار شناخته شدند. نتایج حاصل از بررسی نشان داد که افزودن مقدار 33/0% غلظت رزین آمبرلیت در حالتی که 2/27 ساعت از آغاز تلقیح سپری شده و در نهایت دوره تخمیر 7 روزه، دارای بالاترین اثر ترکیبی به منظور افزایش کارایی روش استخراج درجا بوده و باعث جذب حداکثر غلظت پرسی پپتید یعنی µg/ml 84/93 در استخراج درجا می شود.
- Abstract
- Today, discovery of natural products especially actinomycetes is developing and novel antibiotics are necessary in order to treatment of infectious disease which their resistance are increasing. Persimycin is the first Iranian peptide bio-compound with antibacterial activity which is produced by Streptomyces zagrosensis UTMC 1154. Researchs about clinical application of this peptide secondary metabolite are needed to high purification degree of compound for enterance to clinical phase and in vitro or in vivo trials. Therefore, To produce high quantity of persipeptides for further drug evaluation, it is crucial to design approaches aimed at improvement of the extraction conditions.In this study, in order to persipeptide purification and identification of other metabolites fermentation was done by flask and fermntor. After solvent extraction, purification of crude extract was done by chromatographic methods such as Silica gel, Sephadex LH-20 and Diol. Finaly, mass spectrophotometry was used to identify purified and semi-purifid compounds.Moreover, different extraction methods such as extraction with various solvents, solid phase extraction by silica and C-18 and application of adsorbents into fermentation medium were done for recovery improvement. Then capacity adsorption of various reins were compared with standard method (buthanol extraction) and each other. Ambelite XAD-16 was selected as an efficient adsorbent and therefore was applied for in situ extraction method and optimization of three factors like resin concentration, addition time of resin into fermentation medium and interaction between them was done by using of full factorial experimental design.Results analysis by ANOVA and Design Expert 7.0.0 software showed that resin concentration and interaction between resin concentration and adding time, are main and important factors. The results showed the amount of 0.33% amberlite XAD-16 N added at 27.2 hour post-inoculation was the most effective combination to increase the efficiency of in situ adsorption capacity of persipeptides.
