عنوان پایان‌نامه
کلونینگ و بیان پروتئین آلفا- سینوکلئین
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5807;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 70766;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5807;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 70766
- تاریخ دفاع
- ۰۷ مهر ۱۳۹۴
- دانشجو
- سارا شیخی
- استاد راهنما
- مهریار امینی نسب
- چکیده
- بیماری پارکینسون یک اختلال حرکتی پیشرونده و تحلیل‌برنده سیستم عصبی است که حدود 7 میلیون نفر در سراسر جهان را تحت تأثیر قرار می‌دهد. اخیراً نشان داده شده است که هر دو نوع فرم خانوادگی و تک‌گیر بیماری با این ژن ارتباط دارند. آلفا-سینوکلئین‌ها خانواده کوچکی از پروتئین‌های محلول می‌باشند که در تعدادی از بیماری‌ها مثل پارکینسون نقش دارند. اندازه آنها بین 127-140 آمینواسید می‌باشد، این خانواده دارای 4 عضو شامل؛ آلفا-سینوکلئین، بتا-سینوکلئین، گاما-سینوکلئین و سینورتین می‌باشد. اجتماعات آمیلوئیدی ناشی از این پروتئین عامل اصلی مرگ نورون‌های دوپامینرژیک در مغز بیماران می‌باشند. ازاین‌رو محققان همواره به دنبال مطالعه بر روی این پروتئین برای توسعه درمانی در جهت حذف یا کاهش اثرات نامطلوب آن می‌باشند. هدف از پروژه حاضر واردکردن cDNA آلفا-سینوکلئین انسانی در حامل‌های pET28a و pET32a جهت ساخت پلاسمیدهای نوترکیب قادر به بیان پایدار آلفا-سینوکلئین می‌باشد.cDNA آلفا-سینوکلئین انسانی توسط PCR و استفاده از پلاسمید pRK174 نوترکیب کد کننده آلفا-سینوکلئین به‌عنوان الگو، سنتز شد. cDNA سنتز شده سپس توسط آنزیم‌های محدودگر SalI و HindIII برش داده شد؛ و درحامل‌های pET28a و pET32a برای ایجاد پلاسمیدهای نوترکیب pET28a-?-synuclein و pET32a-?-synuclein کلون شد. درنهایت، پلاسمیدهای نوترکیب به سویهBL21(DE3) باکتریEscherichia coli به‌وسیله روش کلسیم کلراید منتقل شدند. بیان cDNA آلفا-سینوکلئین توسط IPTG القا و پروتئین آلفا-سینوکلئینن القاشده با روش الکتروفورز روی ژل SDS پلی اکریل آمید تأیید گردید.
- Abstract
- Parkinson’s disease (PD) is a progressive neurodegenerative movement disorder that affects approximately 7 million people worldwide. Recently, have been showed that the Alpha-synuclein gene has been linked to both familial and sporadic forms of PD. Synucleins are a small family of soluble proteins that potentially have a role in a number of disorders such as Parkinson’s disease (PD). Ranging in size from 127 to 140 amino acids, the family consists of 4 members; ?-, ?-, ?-synuclein and synoretin. Amyloid aggregates triggered by this protein are the major cause of dopaminergic cell death in patients' brains.Therefore, researchers are continuously investigating this protein looking for development of new treatment methods to reduce or neutralize its undesirable effects. The aim of the current investigation was to insert human ?-synuclein gene into pET28a and pET32a vectors to construct recombinant plasmids capable of sustained expression of ?-synuclein. Human ?-synuclein cDNA were amplified by polymerase chain reaction (PCR) using pRK174 plasmid as template. The synthesized cDNA was then digested by SalI and HindIII restriction enzymes and cloned into two expression vectors: pET28a and pET32a; to obtain recombinant plasmids: pET28a-?-synuclein and pET32a -?-synuclein. The resulting recombinant plasmids were transfected into the BL21 strain of Escherichia coli by exposure to calcium-Chloride method. Finally, the expression of Alpha-synuclein gene was induced by IPTG and the expressed ?-synuclein protein was verified by SDS poly-acrylamide gel electrophoresis method.Keyword: Parkinson, Alpha-synuclein, cloning, polymerase chain reaction, genetic engineering
