عنوان پایان‌نامه
افزایش حساسیت سلول های سرطان سینه نسبت به کوئرستین از طریق کاهش بیان DFF۴۵/ICAD
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6222;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 74047;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 6222;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 74047
- تاریخ دفاع
- ۳۰ شهریور ۱۳۹۴
- دانشجو
- تکتم سادات کلینی
- استاد راهنما
- شاهرخ صفریان, سیدجلال زرگر
- چکیده
- امروزه تکنولوژی RNAi به عنوان یکی از روش‌های نوین در درمان سرطان استفاده می‌شود. در این فناوری امکان کاهش بیان ژن‌ها از طریق ارسال یک RNA دو زنجیره‌ای، که توالی یکی از زنجیره‌ها در آن مکمل توالی یک ژن مشخص می‌باشد و موجب تجزیه‌ی mRNA هدف می‌شود، وجود دارد.در سال‌های اخیر فلاونوئیدهایی مانند کوئرستین به عنوان داروهای جدید ضدسرطان مورد توجه قرار گرفته‌اند. مکانیسم اثرگذاری کوئرستین از طریق توقف چرخه سلولی، مهار تکثیر سلول و القاء آپوپتوز گزارش شده است. هدف از این مطالعه حساس‌تر نمودن سلول‌های سرطانی سینه نسبت به آپوپتوز به منظور فراهم آوردن شرایطی برای ظاهر شدن اثرات کشندگی کوئرستین، به عنوان داروی انتخابی در درمان سرطان سینه، در غلظت‌های کمتر بود تا از این طریق اثرات جانبی این دارو تا حد امکان کاسته شود. آزمون MTT جهت تعیین زمان و غلظت مناسبی از دارو که توان حیاتی سلول‌ها را به میزان 50 درصد کاهش دهد، انجام شد. سپس بیان ژن dff45 و تعدادی از ژن‌های مسیر آپوپتوز (caspase3 ، aif ، bcl-2 ، p53 و bax)، اتوفاژی (lc3 ، atg5 ، dram و beclin) همراه با ژن‌های محور بقاء سلولی(akt1 ، mtor و pten) در سلول‌های تیمار شده با DFF45 siRNA، کوئرستین و (siRNA + کوئرستین) با روش Real Time RT-PCR بررسی شد. با توجه به نتایج حاصل از آزمون MTT، LC50 داروی کوئرستین برابر با 220 میکرومولار تعیین گردید. نتایج حاصل از Real Time RT-PCR نشان دهنده به راه افتادن مسیرهای مرگ سلولی از طریق اتوفاژی در سلول‌ها می‌باشد. همچنین تیمار همزمان (siRNA + کوئرستین) در مقایسه با تیمار کوئرستین سبب افزایش سازوکار مرگ القا شده در سلول‌ها می‌شود. بنابراین کاهش بیان ژن dff45 که موجب القاء مرگ سلولی می‌شود، می‌تواند روش جدیدی در درمان سرطان سینه باشد.
- Abstract
- Nowadays RNA interference (RNAi) technology is used as a new methodology in cancer therapy. RNAi can probably decrease the expression of genes by sending a double-stranded RNA- in which - sequence of a strand that complements the sequence of a specific gene, make the target mRNA to be cleaved.In recent years, Flavonoids like Quercetin are known as an anti-cancer agent. The Quercetin Effectiveness mechanism has been reported to be through Cell cycle arrest, inhibition of proliferation and induction of apoptosis. The purpose of this study is to decrease Quercetin’s side effects by increasing breast cancer cells’ sensitivity to prepare an environment for displaying Quercetin cytotoxicity in lower concentrations.The drug cytotoxicity on MCF-7 cell line, assessed by MTT test with 48 hours of Quercetin treatment. Total RNAs were extracted from cells incubated with DFF45 siRNA, Quercetin and )Quercetin+DFF45 siRNA(. The gene expression levels were detected by Real time PCR.According to the cell viability diagrams, the LC50 value for Quercetin was determined 220 µM. Real time PCR results indicate that the simultaneous treatment of Quercetin and DFF45 siRNA decreases the expression of dff45. Analysis of Apoptotic (caspase3, p53, bax, bcl-2 and aif) and autophagic (lc3, atg5, beclin and dram) genes along with survival genes (akt1, mtor and pten) reveals that )Quercetin+DFF45 siRNA( completely blocked the apoptosis and down regulate survival genes but trigger autophagy pathway.One of the regulating pathway of Apoptosis is forcing the inhibitory effect of DFF45/ICAD on DFF40/CAD nuclease. Downregulation of dff45, when applied with Quercetin, leads to induction of cell death, may offer a novel therapeutic strategy for treatment of breast cancer.
