عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر سیلیبینین در بیان ژن های ESR۲ ، ESR۱ و ERBB۲ در رده سلولی EKBR۳ سرطان سینه در کشت سه بعدی
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم‌سلولی‌مولکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5854;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71750;کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5854;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71750
- تاریخ دفاع
- ۲۸ شهریور ۱۳۹۴
- دانشجو
- زهرا مهارت
- استاد راهنما
- نسرین معتمد
- چکیده
- بعد از سرطان پوست شایع‌ترین سرطان در زنان، سرطان سینه است که حدود ??درصد از سرطان‌های زنان را شامل می‌شود. از آنجایی که حدود ?? درصد از سرطان‌های سینه ER? و حدود ?? درصد از سرطان‌های سینه HER2? هستند یافتن ترکیبی که بتواند باعث کاهش بیان ژن این گیرنده‌ها گردد و اثرات جانبی کمتری داشته باشد ارزشمند خواهد بود. در این میان آنتی‌اکسیدانت های پلی فنول طبیعی به علت کارایی بالا و اثرات جانبی کم، یکی از موثرترین ترکیبات مهارکننده سرطان شناسایی‌شده‌اند. سیلی مارین یکی از این ترکیبات است که جز فعال گیاه خار مریم می‌باشد که شامل فلاوولیگنان های زیادی از جمله سیلی بین است که ماده مؤثره این گیاه می‌باشد و دارای دو خاصیت آنتی‌اکسیدانی و ضد سرطانی است. با توجه به اینکه تاکنون گزارشی مبنی بر اثر سیلیبینین بر القای آپوپتوز در کشت سه بعدی که تصویر واقعی تری از شرایط سلول‌ها در بدن موجود زنده می‌باشد و امروزه جهت مطالعات دارویی بهره گرفته می‌شود انجام‌نشده، در این مطالعه قصد داریم که اثر آن را بر القای آپوپتوز و بیان ژن در سلول‌های SKBR3 مشتق از سرطان سینه در کشت سه بعدی مورد بررسی قرار دهیم.روش کار:در این مطالعه ابتدا غلظت‌های مختلف سیلیبینین (?? تا ??? میکرو مولار) بر سلول‌های کشت داده‌شده در شرایط سه بعدی بر روی بستر آگاروز اثر داده شد و درصد زنده ماندن این سلول‌ها پس از تیمار توسط روش APH در کشت سه بعدی مورد سنجش قرار گرفت و دز ?? درصد کشندگی آن مورد محاسبه قرار گرفت. در مرحله‌ی بعد القای آپوپتوز و سیکل سلولی با فلوسایتومتری بررسی شد. همچنین اثر آن بر بیان سه ژن Bax، Bcl2 و ERBB2 توسط Real time PCR مورد بررسی قرار گرفت.نتایج:کاهش درصد زنده‌بودن سلول‌ها به‌واسطه‌ی افزایش غلظت سیلیبینین نشان‌دهنده‌ی اثر کاهشی این دارو بر تکثیر سلول های SKBR3 در کشت سه بعدی به‌صورت وابسته به دز و زمان می‌باشد. همین‌طور سیلیبینین در دزی پایین‌تر از ??% کشندگی سبب وارد شدن سلول‌ها به فاز نهایی آپوپتوز می‌شود و در بررسی سیکل سلولی اثری بر توقف چرخه سلولی نداشته و سبب افزایش فاز sub G1 شده است که دال بر اثر آپوپتوزی این دارو در این رده‌ی سلولی می‌باشد. به دنبال آن سیلیبینین باعث القای آپوپتوز با کاهش معنی‌داری در بیان ژن Bcl2 شد در مقابل سیلیبینین تغییرات معناداری در بیان ژن Bax ایجاد نکرد. همچنین این دارو باعث کاهش معناداری در بیان ژن ERBB2 داشته است. در واقع در این مطالعه توانستیم برای اولین بار اثر سیلیبینین را به‌عنوان یک داروی ضد سرطانی که اثرات سمی پایینی دارد بر کاهش درصد زنده‌بودن سلولی و القای آپوپتوز در کشت سه بعدی که یک مدلی ساده از بافت در شرایط in vivo می‌باشد، اثبات کنیم.
- Abstract
- Introduction:Worldwide, breast cancer is the most common cancer in women, after skin cancer, representing 16% of all female cancers.About 70% of breast cancer are ER? and 30% are HER2?.Therefore, searching for a component to decrease the gene expression of these receptors and having less side effects can be very useful.Natural polyphenols are one of the most effective component for inhibiting cancers for their high efficiency and less side effects. The principle component of Milk Thistel is Silybin, a polyphenolic flavonolignan isolated from Silymarin, and has both anti-oxidant and anti-cancer properties. Since there is no information on its effect on apoptosis induction in 3D culture which more closely mimic natural tissues and organs than cells grown in 2D and provides better way for investigation of anti-cancer drugs, we initiated studies to effect of silibinin on induce apoptosis and gene expression in SKBR3 breast cancer cells cultured under 3D condition.Materials and methods:In this study the first we assay effect of different concentrations of silibinin (50 to 350 ?M) in cells cultured in 3D condition on garose surface and cell viability was measured by APH assay and IC50 was assessed after incubation cells by silibinin.Next apoptose induction and cell cycle was determined by flowcytometry. Also, effect of this drug on three genes Bax, Bcl2 and ERBB2 were assessed by Real time PCR.Result:Increasing silibinin concentration caused reduction of cell viability in SKBR3 spheroids that show silibinin treatment inhibited cell proliferation in a dose and time dependent manner.Also, in dose of lower than IC50, silibinin increased late apoptosis cell population and in cell cycle assay has no effect and cause to increasing sub G1 phase that show apoptosis effect of this drug in cell line.in folowing silibinin cause apoptosis induction by strong downregulation in Bcl2 gene expression in contrast silibinin didn’t induce significant alteration in gene expression of Bax.Also, silibinin cause strong downregulation in ERBB2 gene expression.Conclusion:In fact, In this study we demonstrated for the first time that silibinin can act as an anti carcinogenic compound that has low side effect by reducing cell viability and inducing apoptosis in 3D cell culture which is considered as simple and more relevant model of in vivo tumors.Key words: SKBR3, Apoptosis, cell cycle, Silibinin, 3D culture
