عنوان پایان‌نامه
کلونینگ و بیان خارج سلولی فاکتور تحریک کننده رشد گرانولوسیت-ماکروفاژ در مخمر
- رشته تحصیلی
- علوم فنون - بیوتکنولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده علوم و فنون نوین شماره ثبت: 592;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 79425;کتابخانه دانشکده علوم و فنون نوین شماره ثبت: 592;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 79425
- تاریخ دفاع
- ۱۴ اسفند ۱۳۹۵
- دانشجو
- سجاد یزدان پناه
- استاد راهنما
- محمد برشان تشنیزی
- چکیده
- GM-CSF یکی از اجزای خانواده فاکتور‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌های تحریک‌‌‌‌‌‌‌‌‌‌کننده کلونی (CSFs) می‌باشد و باعث تولید کلنی‌های گرانولوسیت و ماکروفاژ از پیش سازهای مغز استخوان در شرایط in vitro میشود. این پروتئین در کنار تولید و تمایز سلول‌های خون‌ساز از پیش سازهایشان، تأثیرات دیگری نیز بر روی فعالیت سلول‌های خون‌ساز، شامل تقویت عرضه آنتی‌ژن، القای فاگوسیتوز باواسطه آنتی‌بادی و کمپلمانت و افزایش شیمیوتاکسی در لوکوسیت‌ها دارد. GM-CSF نقش کلیدی در تنظیم تولید و عملکرد گلبولهای سفید خون (گرانولوسیتها و منوسیت‌ها) و همچنین اهمیت کلینیکی در مبارزه با عفونتها دارد. به‌علاوه GM-CSF مزایای کلینیکی مفیدی در حوزه‌های شیمیدرمانی، پیوند مغز استخوان، سرطان و سندروم نقص ایمنی اکتسابی (AIDS) دارد. این پروتئین برای کاهش دوره نوتروپنیا (neutropenia) به دنبال شیمیدرمانی در بیماران سرطانی، جهت کاهش عوارض عفونی ناشی از رژیم‌های دارویی سرکوب‌کننده فعالیت مغز استخوان، مورداستفاده قرار میگیرد. تجویز GM-CSF باعث القای افزایش تولید نوتروفیل‌ها، منوسیت‌ها و ائوزینوفیل‌ها میشود؛ بنابراین باعث افزایش فرایند تشکیل سلول‌های خونی و مغز استخوان (myelopoiesis) همزمان با به‌کارگیری شیمیدرمانی و تابش (radiation) میشود. نتایج آزمایش‌ها کلینیکی پیشنهاد میدهد که تجویز GM-CSF باعث کاهش اثرات سمی ناشی از شیمیدرمانی میشود؛ بنابراین به‌کارگیری GM-CSF در فرایند شیمیدرمانی برای درمان سرطان نهتنها باعث کاهش بروز و شدت عفونتها میشود، بلکه این اجازه را میدهد که دوز داروهای شیمیدرمانی را بدون نگرانی افزایش داد و بهبودی بیمار تسریع گردد و درنهایت باعث کاهش دورههای درمانی و به دنبال آن کاهش هزینه‌های درمانی و بیمارستانی میشود. تولید نوترکیب این پروتئین دارای اهمیت ویژه‌ای است چراکه می‌بایست پروتئینی مشابه پروتئین طبیعی در بدن تولید شود که طبیعتاً عملکرد آن تغییری نکند و مهم‌تر از همه بتوان از آن به‌عنوان یک داروی بی‌خطر استفاده کرد. از مخمر P. pastoris با توجه به برتری‌هایی که در خصوص بیان پروتئین‌هایی ازاین‌دست دارد به‌عنوان میزبان بیانی استفاده شده است. در پایان مقادیر قابل‌توجه پروتئین که منتج از شرایط مناسب بیان در میزبان مخمری است، تعیین خصوصیات پروتئین و پیش‌زمینه‌ی مطالعات بیشتر بر روی آن را امکان‌پذیر ساخت.
- Abstract
- Granulocyte–macrophage colony stimulating factor (GM- CSF) is a pleiotropic cytokine involved in the survival, differentiation, and proliferation of granulocyte–macrophage populations. Quite predictably, GM-CSF has demonstrated the ability to enhance the clinical management of immunosuppressed patients with cancer. Recombinant GM-CSF has been successfully used in many ways like improvement of acute and chronic states of neutropenia after chemotherapy and bone marrow transplantation as well as adjunctive therapy with anti- microbials. The synthesized cDNA coding for human GM-CSF gene was subcloned into pEP101? vector and secretory expressed using PichiaPINK™ expression strain Pichia pastoris under control of the derepressed FMD promoter. Keywords: GM-CSF، Pichia pastoris، Molecular cloning، Yeast، Gene expression
