عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر هایپر ترمیا بر بیان دو ژن ATM و EGFدر سلول سرطانیA۴۳۱
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 35878;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10269ب
- تاریخ دفاع
- ۰۲ آبان ۱۳۸۶
- دانشجو
- مرتضی خبیری
- استاد راهنما
- بهرام گلیائی
- چکیده
- هایپرترمیا یکی از روش های مهم در درمان سرطان هاست که به صورت ترکیب با روش های دیگر مثل شیمی درمانی یا پرتو درمانی به کار می رود. فاکتور رشد اپیدرمی یکی از فاکتورهای مهمی است که به موازات پیشرفت سرطان در DNA بیماران سرطانی ترشح و سنتز آن افزایش می یابد. در این میان نقش حرارت در جلوگیری از ترمیم آسیب های EGF ?? ng/ml ناشی از پرتو درمانی و شیمی درمانی از اهمیت بالایی برخورداراست. از سوی دیگر اضافه کردن و هم در سطح پروتئین فروتنظیم mRNA را هم در سطح ATM خارجی به محیط کشت سلولهای فیبروبلاستی ژن EGF در مسیر علائم سلولی می باشد. با توجه به اثر DNA یکی از عوامل موثر در ترمیم آسیب های ATM . می کند ناشی از EGF این سوال مطرح می شود که آیا افزایش EGF و نیز اثر هایپرترمیا بر روی بیان ATM خارجی بر روی که دارای سطح A گردد؟ به همین منظور از سلول های 431 ATM اعمال شوک حرارتی می تواند سبب تغییر بیان ژن به صورت تک لایه و رسم منحنی رشد A می باشند، استفاده شد. ابتدا با کشت سلول های 431 EGF ترشحی کمی از مربوطه، فازهای مختلف رشد و زمان دو برابر شدن جمعیت سلولی برای این رده سلولی مشخص شد. پس از این ?? طی زمان های صفر، یک و دو oC ?? و oC مرحله سلول ها را که در فاز لگاریتمی رشد قرار داشتند در دو دمای ?? oC ساعت حرارت دهی شدند. بعد از هر زمان حرارت دهی سلولها طی دو زمان صفر و یک ساعت در دمای کل آنها استخراج گردید. بعد از اطمینان از RNA انکوبه شدند. پس از طی زمان انکوباسیون، سلول ها تریپسینه شده و انجام شد. نتایج EGF و ATM برای بررسی بیان دو ژن RT-PCR استخراجی، عملیات RNA صحت سلامت افزایش می یابد ولی در بیان ژن A در سلول های کشت تک لایه سلول های 431 EGF نشان می دهند که بیان ژن می EGF تغییری ایجاد نمی شود. مطالعات نشان می داد که هایپرترمیا سبب چهار تا پنج برابر مقدار اولیه ATM تقریبا" دو برابر حالت اولیه می گردد که این مقدار برای تحت EGF گردد، ولی در آزمایشات مشاهده شد که مقدار به آن mRNA ATM ناکافی است. از دلایل دیگری که می توان برای عدم تغییر DNA تاثیر قرار دادن سیستم تعمیر از طریق مسیر سیگنالینگ دیگر می باشد. ATM اشاره کرد فعال شدن فعالیت کینازی
- Abstract
- Hyperthermia is the most important procedure in the treatment of cancer which generally used with other methods of therapy like radiation therapy or chemotherapy. Scientist investigation has been shown that EGF is an important factor that synthesis and expressed in cancer progression. Amid of this phenomenon the role of hyperthermia to avoid DNA damage, repair of radiotherapy and chemotherapy is significant. On the other hand study showed that addition of 50 ng/ml EGF to fibroblast cell culture down regulated ATM both in ATM mRNA and protein level. ATM is a main factor on repair of DNA damage in signaling pathway. With due attention the effect of external EGF on ATM and hyperthermia effect on EGF, could EGF gene expression change ATM gene expression? For this reason, vulvar cancer cell line which had a low EGF expression being used. Firstly, A431 cell line cultured as monolayer. After drawn of growth curve, lag, log and plateau phase of this cells determined until log phase end point. Then, flask adherent's cells heat shock at 42 and 43 °C for 0h, 1h, and 2 h with 0 and 1h incubation time at 37oC. After that, total RNA of shocked cells extracted and RT-PCR done for each sample. The studying of ATM and EGF gene expression was next step. The band intensity of PCR product is a criterion of EGF and ATM mRNA level in cells. Result shows that EGF expresses ~ 2 fold after 2 h heat shock; meanwhile ATM gene don't express after heat shock. This phenomenon may be due to this reason that heat induces other signaling pathways which involved just ATM protein kinase activation.
