عنوان پایان‌نامه
مطالعه زندگی درون سلولی Helicobacter pylori در مخمرهای Candida albicans و Saccharomyces cerevisiae
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی علوم میکروبیولوژی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4650;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 51556
- تاریخ دفاع
- ۲۶ بهمن ۱۳۹۰
- دانشجو
- رقیه نوابی
- استاد راهنما
- فریده سیاوشی
- چکیده
- مقدمه: راه انتقال H.pylori شناخته شده نیست. S.cerevisiae و Candida spp از انواع مواد غذایی جدا می شوند. هدف از این تحقیق بررسی امکان زندگی درون سلولی باکتری H.pylori در مخمرهای S.cerevisiae و Candida spp است. روش ها: 55 مخمر از مواد غذایی ماست، پنیر، دوغ، بستنی، خمیرمایه نانوایی، نان، خرما، انگور، لبو، پیاز، گوجه فرنگی، آب لیمو، مربا، شیرینی، کیک و چای کامبوچا جداسازی شد. برای حذف آلودگی احتمالی به باکتری مخمرها بر روی محیط دارای کلرامفنیکل کشت داده شدند. لام مرطوب مخمرها در زیر میکروسکوپ مشاهده شد. DNA کامل مخمرها استخراج و جهت تعیین هویت آنها، PCR برای ژن های اختصاصی S.cerevisiae و Candida spp انجام شد. سپس PCR برای ژن 16SrDNA اختصاصی H.pylori انجام شد. محصولات PCR از هر نوع مخمر برای تعیین هومولوژی با ژن تکثیر شده از H.pylori کنترل، توالی یابی شدند. نتایج: از 55 مخمر مورد بررسی 19 S.cerevisiae، 1 C.tropicalis، 5 C.krusei، 7 Candida spp شناسایی شدند. 24 مخمر دیگر شناسایی نشدند. زیر میکروسکوپ اجسام شبه باکتریایی متحرک درون واکوئول مخمرها مشاهده شد. ژن 16S rDNA اختصاصی H.pylori (bp 519) در 11 مخمر (19/7 S.cerevisiae (ماست، بستنی، خمیرمایه، خرما)، 5/1 C.krusei (دوغ)، 7/1 Candida spp (آب لیمو) 24/2 مخمر شناسایی نشده(ماست، لبو)) تکثیر شد. نتایج تعیین توالی قطعات تکثیر شده ژن 16S rDNA اختصاصی H.pylori در یک مخمر S.cerevisiae، C.krusei، Candida spp و H.pylori کنترل یکسان بود. بحث: شناسایی ژن 16SrDNA اختصاصی H.pylori در مخمرهای غذایی در این مطالعه نشان می دهد از آنجا که مخمرها به عنوان یک تک سلولی آزادزی در زیستگاه های مختلف از جمله مواد غذایی در کنار باکتری ها حضور دارند شاید بتوانند به عنوان پناهگاهی محافظ برای این باکتری سخت پسند و انتقال آن از طریق مواد غذایی به انسان مطرح شوند.
- Abstract
- Background: The routes of transmission of Helicobacter pylori are unknown. S.cerevisiae and candida spp are isolated from different types of food. The aim of this study was assessment of the possibility of endosymbiotic life of H.pylori in S.cerevisiae and Candida spp. Material and methods: 55 yeast were isolated from yogurt, cheese, buttermilk, ice cream, bakery leaven, bread, date, grape, beets, onion, tomato, lemon-juice, jam, pastry, cake and kombucha tea. Yeasts were subcultured on Yeast extract Glucose Chloramphenicol (YGC) Agar to eliminate any possible bacterial contamination. The wet-mount of yeasts were observed under light microscope. Total DNAs were extracted and PCR was performed to identify S.cerevisiae and Candida spp. Furthermore, PCR was performed to amplify H.pylori 16SrDNA genes. Amplified products from each type of yeast, sequenced to determine homology with amplified genes of H.pylori control. Results: From 55 yeast, 19 were identified as S.cerevisiae, 1 as C.tropicalis, 5 as C.krusei & 7 as Candida spp. 24 other yeasts did not identify. Moving BLBs (bacterial-like bodies) were observed inside the vacuoles of all yeasts. H.pylori- specific (519bp) 16srDNA genes were amplified in 11 yeasts (7/19 Saccharomyces cerevisiae isolated from yogurt, ice cream, bakery leaven, date, 1/5 C.krusei isolated from buttermilk, 1/7 Candida spp isolated from lemon- juice, 2/24 unidentified yeasts isolated from yogurt, beets). Sequencing results revealed 100% homology between the amplified products from yeasts S.cerevisiae, C.krusei, Candida spp and H.pylori control. Discussion: Detecting of H.pylori 16SrDNA genes in food-borne yeasts in this study indicate that yeasts which are free-living unicellular microorganisms in different habitats such as food products which can act as protective niche for fastidious bacteria such as H.pylori and these results can propose food products as a routes of transmission of H.pylori to humans.
