عنوان پایان‌نامه
بیان گذرا ژن اوره آزب(Jreb) از Helicobacter pylori در آپوبلاست سویا و کاهو
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی -بیوتکنولوژی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 5113;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 55435
- تاریخ دفاع
- ۲۶ بهمن ۱۳۹۰
- دانشجو
- ندا ملکی تبریزی
- استاد راهنما
- هوشنگ علیزاده
- چکیده
- هلیکوباکتر پیلوری یکی از عوامل عمده ایجاد گاستریت مزمن، زخم های گوارشی و سرطان معده است. ایجاد واکسن علیه هلیکوباکترپیلوری، به عنوان راه حل مطلوب برای درمان و جلوگیری از عفونت باکتری در مجامع علمی مطرح شده‌است. زیرواحد ب ژن اوره آز موثرترین و رایج ترین ایمنوژن تمامی سویه‌های هلیکوباکترپیلوری است که قادر به ایجاد پاسخ ایمنی محافظتی در بدن حیوان و انسان علیه این باکتری می‌باشد. در این پژوهش این آنتی ژن در دو سازه مجزا، که به ترتیب دارای توالی های هدایتگر آپوپلاستی و ادجوانت مخاطی در بالادست ژن بودند همسانه‌سازی شد. هر دوی این سازه ها به سویا و کاهو با استفاده از استراتژی اگرواینفیلتراسیون انتقال یافتند. ارزیابی پروتئین با استفاده از روش الایزا غیرمستقیم با آنتی بادی پلی‌کلونال سرم انسانی علیه هلیکوباکترپیلوری، بیان پروتئین به میزان mg/kg3 از برگ تازه را نشان داد که برابر با یک درصد (1%) از کل پروتئین‌های تولیدی در گیاهان بود. همچنین سازه دارای توالی آپوپلاستی، بصورت پایدار در گیاه توتون بیان گردید. ارزیابی بیان ژن در سطح ترنسکریپتوم با پی‌سی‌آر زمان واقعی تفاوت بیان میان لاین های مختلف تراریخت را بخوبی نشان داد و همچنین ارزیابی پروتئین موجود در آپوپلاست، بیان پروتئین به میزان mg/kg2/3 از برگ تازه را نشان داد که برابر با یک دهم درصد (1/0%) از کل پروتئین‌های موجود در آپوپلاست گیاه بود را نشان داد. این پژوهش نشان داد که هدایت پروتئین به بخش آپوپلاستی با استفاده از توالی هدایتگر هویج، ضمن کارا بودن در گیاه توتون، منجر به افزایش میزان پروتئین تولیدی و همچنین بالاتر رفتن درصد پروتئین نوترکیب در میان کل پروتئین‌های محلول در این بخش می‌گردد. این روش علاوه بر تسهیل در استخراج پروتئین، می‌تواند به دلیل آلودگی کمتر پروتئین های همراه، هزینه پایین دستی مرتبط به تخلیص پروتئین را کاهش دهد.
- Abstract
- Helicobacter pylori (H. pylori) is established as the etiologic agent of chronic active gastritis, peptic ulcer and gastric cancer. The development of a vaccine against H. pylori has become a priority to prevent and cure H. pylori infection in scientific societies. The UreB (urease B) subunit is the most effective and common immunogen of all strains of H. pylori and can stimulate the immune response protecting the animal and human body against the challenge of H. pylori. In this study this antigen produced with apoplastic signal peptide & mucosal adjuant in two different constructs. Then transferred to soybean & lettuce with agroinfiltration strategy. Assessment of protein through indirect ELISA With human polyclonal antiserum demonstrated that the average of expressed UreB protein accounted for 3mg/kg that was one percent(1%) from total proteins. Also construct with apoplastic leader transferred to tobacco with stable approach. Expression assessment in transcriptome levels revealed significant difference among the transgenic lines well and also protein assay demonstrated that the average of expressed UreB protein accounted for 3/2mg/kg that was 0/1% from total proteins that exist in apoplastic space. These results showed that utilization of carrot exstensin signal peptide, can be an efficient method for increasing of percentage of recombinant protein among total soluble protein and because of lower protein contamination can decrease down stream expense of protein purification.
