عنوان پایان‌نامه
:« اثرات سانتریفوژ بر کیفیت اسپرم اسبچه خزر قبل و بعد از سرد کردن »
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 4980;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 54660
- تاریخ دفاع
- ۲۰ دی ۱۳۹۰
- دانشجو
- هوشنگ نوری
- استاد راهنما
- آرمین توحیدی
- چکیده
- رقیق¬کننده¬های منی برای استفاده با منی تازه و سرد شده در صنعت اسب به صورت قابل قبولی در حال گسترش است.اما مطالعات اندکی بر روی اسبچه¬خزر در این زمینه انجام شده است. سه آزمایش برای ارزیابی اثر رقیق¬کننده¬های مختلف (بر پایه فسفوکازئینات و شیر خشک بدون چربی)، پروتکل¬های مختلف سانتریفوژ (دور و زمان سانتریفوژ) برای حفاظت از سردکردن و انجماد منی اسبچه¬خزر طراحی شد. برای انجام این تحقیق، چهارسر اسبچه خزر بالغ انتخاب شد و اسپرم¬گیری با واژن مصنوعی مدل میسوری انجام گرفت. جنبایی، جنبایی پیشرونده و ویژگی¬هایحرکتیاسپرم با کمک سیستم آنالیز رایانه‌ای اسپرم اندازه¬گیریشد. ویژگی‌های زنده‌مانی، یک¬پارچگی غشا نیز به ترتیب به روش رنگ¬آمیزی ائوزین-نگروزین و تست Host ارزیابی شد. در آزمایش اول رقیق¬کننده¬هایی که مقایسه شدند شامل:EZmixin, Kenny, INRA96، CPE (رقیق کننده ابداعی). ارزیابی تحرک با استفاده از سیستم¬های رایانه¬ای (CASA) در زمان¬های صفر، 24 و 48 ساعت سردسازی و بعد از انجماد تعیین ¬شد. جنبایی و جنبایی پیش رونده در طول زمان کاهش پیدا کرد (05/0p?). جنبایی، جنبایی پیشرونده اسپرم در 48 ساعت در رقیق کننده CPEو INRA96 در مقایسه با رقیق¬کننده¬های کنی وEZMixin بیشتر بود (5/0p? ). سرعت در مسیر مستقیم اسپرم رقیق شده در INRA96، در مقایسه با سه رقیق کننده دیگر بیشتر بود (05/0 p?). اسپرم¬های رقیق شده در CPEسرعت در مسیر منحنی بالاتری نسبت به اسپرم¬های رقیق شده در سایر رقیق کننده¬ها در زمان¬های 24 و 48 ساعت پس از سردسازی داشت (05/0 p?). میانگین سرعت در مسیر اسپرم اسبچه¬خزر، در رقیق¬کننده¬های INRA96 و CPE در طی 24 و 48 ساعت سردسازی، در مقایسه با دو رقیق¬کننده دیگر افزایش معنی¬داری داشت، که این افزایش در اسپرم¬های رقیق شده در CPEدر مقایسه با INRA96 بیشتر بود و دارای اختلاف معنی¬داری بود (05/0 p?). در آزمایش دوم هدف، تعیین اثر پروتکل¬های مختلف سانتریفوژ( دور و زمان سانتریفوژ) بر خصوصیات اسپرم اسبچه¬خزر است. نمونه¬های منی از اسبچه¬¬های¬خزر جمع¬آوری شد و در رقیق¬کننده CPE¬ تا غلظت 106×50 اسپرم بر میلی¬لیتر، رقیق¬سازی شد و برای مدت زمان4و 7 دقیقه در تیمارهای (بدون سانتریفوژ،× g500، 1000، 2000) قبل و بعد از سانتریفوژ و بعد از 24 و 48 ساعت سردسازی شد. ویژگی¬های جنبایی، با استفاده از سیستم رایانه¬ای( CASA) ، زنده¬مانی بوسیله رنگ¬آمیزی ائوزین- نگروزین و یک¬پارچگی غشا پلاسمایی بوسیله تست Host ارزیابی شد. با مقایسه تیمارها، تیمارهای گروه 2000 نشان داد که جنبایی، زنده¬مانی و یک¬پارچگی غشا پلاسمایی اسپرم کاهش یافت (05/0p<). گروه 500 و 1000 در مقایسه با گروه بدون سانتریفوژ نتایج بهتری از کیفیت اسپرم ذخیره شده نشان داد (05/0p<). گروه تیمار 500 و 1000 نرخ بازیافت پایین¬تری از گروه 2000 نشان داد (05/0p<). در مجموع سانتریفوژ g ×1000 در 7 دقیقه آسیبی به اسپرم اسبچه¬خزر نداشت. در آزمایش سوم نمونه های سیمن در رقیق کننده CPE و دور سانتریفوژ 600 در10 دقیقه و 1000 در 7 دقیقه به ترتیب سانتریفوژ و اثرات آن بر کیفیت اسپرم بعد از انجماد مورد ارزیابی قرار گرفتاختلاف معنی¬داری در دو تیمار بعد از انجماد بر تحرک، زنده¬مانی و یک¬پارچگی غشاء مشاهده نشد(05/0p<).
- Abstract
- The use of cooled transported equine semen continues to gain popularity among breeders as its acceptance increases among breed registries. Two experiments were conducted to evaluate the impact of four extenders and different centrifugation protocols on cooled preservation of Caspian poney semen. Comparisons of some extenders have been made but there is need for further research in this area. In experiment 1; Extenders tested included EZ-mixin (Minitube, Germany), Kenney’s (Minitube, Germany), INRA96 (IMV, France), and CPE (Caspian pony extender). Semen was collected from 4 adult Caspian poney with Missouri artificial vagina equipped with an in- line nylon filter to exclude gel from the semen sample and each ejaculate was divided and extended in each of the aforementioned extenders and stored at 4C?. Motility measures were determined using computer-assisted sperm analysis at 0, 24, and 48, hours after collection. Samples were evaluated for total motility, progressive motility (PM), straight-line velocity, curvilinear velocity, straight-line distance. Total motility and PM decreased over time in storage (P <0.05). Sperm stored in INRA 96, and CPE retained the most total motility and PM over the 48 hour period (P <0.05). CPE had the highest measurements for curvilinear velocity, straightline velocity, and curvilinear distance (P < .05). In experiment two: The objectives of this experiment were to determine the effects of centrifugation on Caspian poney sperm progressive motility, viability, and plasma membrane integrity. Ejaculates from four Caspian ponneis were collected, extended (CPE) to a concentration of 50 × 106 cells/mL, and subjected for 4 and 7 min to: 1) no centrifugation (NC); 2) 500 × g (500); 3) 1000 × g (1000); and 4) 2000 × g (2000). Before and after centrifugation (Day 0), and after 24 and 48 h of cooling, sperm motility was assessed by computer assisted semen analysis, and samples were stained with Eozin negrosin for viability, and with Hypo-osmolarity swelling test (Host) for membrane integrity. Compared with the other treatment groups the 2000 treatment group showed reduced motility, viability, and membrane integrity (P<0.05).The uncentrifuged samples, Compared to 500 and 1000 treatment groups centrifugation of semen resulted in a better sperm qualityafter chilled storage. The 500 and 1000 treatment groups yielded lower recovery rates than the 2000 treatment group (NC= 100.0 ± 0.0%, 500 for 4 min = 44.49 ± 3.6%, 500 for 7 min = 55.06 ± 2.3%, 1000 for 4min = 62.4 ± 2.98%, 1000 for 7min = 75.89 ± 2.14% 2000 for 4min = 78.48 ± 1.56%and 2000 for 7min = 89.53 ± 4.31%) (P<0.05). Centrifugation at 1000× g for 7 min did not damage Caspian poney sperm.
