عنوان پایان‌نامه
مطالعه تغییرات اعمال شده در میزان سطح نسخه برداری از ژن های DNA-PK,PARP-۱,DFF۴۰,DFF۴۵ و Caspase در حضور داروهای سولفانامیدی و دوکسوروبیسین در رده ی سلولی T-۴۷D
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری -فیزیولوژی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 4602;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 50577
- تاریخ دفاع
- ۰۵ مهر ۱۳۹۰
- دانشجو
- ثنا هاشمی نسل
- استاد راهنما
- حوری سپهری, شاهرخ صفریان
- چکیده
- سرطان سینه شایع ترین نوع بدخیمی در میان زنان به ویژه در کشور های توسعه یافته می باشد. امروزه برای درمان این سرطان از روش های گوناگونی مانند شیمی درمانی استفاده می شود که گاه عوارض خطرناکی را به دنبال دارند. به همین دلیل، در سال های اخیر، بسیاری از پژوهش ها به هدف شناخت بیشتر مکانیسم ها و مسیرهای سلولی مرتبط با سرطان انجام گرفته است، تا امکان دسترسی به یک سری روش های درمانی بر پایه ایجاد تداخل با مولکول های موثر در سرطان زایی فراهم شود که توانایی بیشتری را در توقف رشد و انتشار سرطان دارا باشند. سولفانامیدها گروهی از داروها هستند که با مهار برخی از متالوپروتئاز های ماتریکسی (MMPs)، مهار فعالیت آنزیم کربونیک انهیدراز و یا ممانعت از پلیمریزاسیون واحدهای توبولین در زمان تشکیل دوک میتوزی خصوصیات ضد توموری از خود نشان می دهند. نتایج حاصل از آزمون هایMTT ،microscope florescent، caspase-3 activity assay، flow cytometery وDNA laddering انجام شده توسط دانشجویان پیشین، بیانگر آن بود که کاهش 50 درصدی رشد و تکثیر سلول های T-47D در زمان تیمار با چهار داروی سولفانامیدی منتخب، نتیجه فرایند آپوپتوز و یا توقف چرخه ی سلولی نمی باشد. همچنین نتایج آزمون RT-PCR به منظور بررسی تغییرات در سطح بیان ژن های دخیل در القای آپوپتوز (Bax وAIF ) و ژن های دخیل در توقف چرخه سلولی (cdc2،cyclin D1،p21 و p27) نیز تاییدی بر یافته های گذشته بود. در این پژوهش به منظور بررسی بیشتر بر روی نتایج قبلی مبنی بر عدم بروز آپوپتوز و توقف چرخه سلولی، از تکنیک تعیین توالی برای بررسی جهش های احتمالی در سوبستراهای کاسپاز-3 (DFF40، DFF45 و PARP-1) و همچنین آزمون Real time RT- PCR برای بررسی تغییرات سطح بیان ژن های دخیل در مسیر آپوپتوزی (AIF، Bcl-2، caspase-3، DFF45، DFF40، PARP-1 و DNA-PK) در حضور داروهای چهارگانه سولفانامیدی و دوکسوروبیسین استفاده شد. نتایج حاصل از تکنیک تعیین توالی، حاکی از عدم بروز جهش در توالی ژنتیکی سوبستراهای کاسپاز-3 است. همچنین، نتایج حاصل از آزمونReal time RT- PCR بر روی ژن های یاد شده تاییدی بر نتایج به دست آمده مبنی بر عدم بروز آپوپتوز در حضور 5 داروی نام برده، می باشد. لذا برای توجیه کاهش 50 درصدی رشد و تکثیر سلولی در حضور داروهای مذکور می بایست مسیر های دیگر سلولی مرتبط با عدم رشد و تکثیر سلولی از جمله مسیرهای مرتبط با رشد و بقای سلولی (AKT/mTOR) و یا اتوفاژی را در این رده سلولی و در حضور این دارو ها مورد بررسی قرار داد.
- Abstract
- Abstract: Breast cancer is the most common malignancy in women especially in developing countries. Nowadays, many methods such as chemotherapy are being used for treatment, but sometimes they have dangerous side effects. Therefore, in order to develop some treatment methods based on interference with effective molecules in carcinogenesis, recently, a huge number of research projects have been held to understand more about the cell signaling and mechanisms of cancer. Sulfonamides are a group of medicines that show anti tumor characteristics. These substances work through matrix metalloprotease inhibition, carbonic anhydrase enzyme inhibition and prohibition of tubulin polymerization during mitotic spindle formation. The previous studies using MTT test, florescent microscopy, caspase-3 activity assay, flow cytometery, and DNA laddering, indicated that 50 percent reduction of cellular count and proliferation, observed in the presence of selected sulfonamides, was not caused through any induction of apoptosis or cell cycle arrest. Moreover the results of RT-PCR technique, that was used to analyze expression of some apoptotic genes (AIF and Bax) and genes related to the cell cycle (p27, p21, cyclin D1, cdc2) confirmed the previous results. In this research, for more confirmation of the previous results about non existence of any induction for apoptosis and cell cycle arrest, we have used the sequencing technique to recognize the possible occurrence of mutation in caspase-3 substrate genes (DFF40, DFF45, PARP-1). Also to investigate possible transcriptional alteration of AIF, Bcl-2, caspase-3, DFF40, DFF45, PARP1 and DNA-PK genes, the Real-time RT-PCR was performed on sulfonamide and doxorubicin treated cells. DNA sequencing did not report any mutation in caspase-3 substrate genes. Also, results of RT-PCR technique on mentioned genes confirmed the previous results about non existence of any induction for apoptosis in presence of 5 forenamed drugs. Thus, to justify 50 percent reduction of cellular count and proliferation, the other cell signaling pathways, which are related to cell growth and survivance (such as AKT/mTOR and autophagy) should be studied in the presence of mentioned drugs.
