عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر سی اس اف بر رده سلولی بی تی ۲۰ و بیان ژنهای متاستازی القاکننده
- رشته تحصیلی
- بیوشیمی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10945ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 49570
- تاریخ دفاع
- ۰۵ مهر ۱۳۹۰
- دانشجو
- امین مهپور
- استاد راهنما
- شهین احمدیان
- چکیده
- فاکتور محرک تکثیر ماکروفاژی(CSF-1) و گیرنده آن(c-fms) در بیش از 50 درصد کارسینوم های پستان، اندومتریوم، تخمدان و پروستات به طور غیر طبیعی بیان می گردد. مطالعه های گذشته نشان می دهد که افزایش بیان این دو فاکتور به طور مستقیم با پیش آگهی بد، گسترش سرطان و متاستاز رابطه مستقیم دارد. اگرچه مطالعه های گذشته دلایلی برای افزایش قدرت تهاجم این نوع سرطان ها ذکر کرده¬اند، با این وجود مکانیسم مولکولی جامعی برای توضیح اثر این فاکتور بر روی سلول های سرطانی وجود ندارد. فرایند انتقال اپیتلیال مزنشیمی برای توضیح مراحل اولیه مکانیسم متاستاز مورد استفاده قرار می گیرد. در این فرایند بسیار پیچیده فاکتور های رونویسی ویژه¬ای نظیر Snail، Slug، Twist و Zeb افزایش بیان پیدا می کنند. در نتیجه بیان این دسته از فاکتور های رونویسی بیان ژن CDH1 که رمز کننده پروتئین اتصالی E-Cadherin است مهار گشته، همراه با آن سلول های اپیتلیالی خصوصیات مورفولوژیکی و مولکولی خود را به صورت کلی و یا جزئی از دست می دهند و خصوصیات سلول های مزنشیمی را اختیار می کنند. از آنجا که خصوصیات مورفولوژیکی سلول هایی که گیرنده CSF-1را بیان می کنند در پاسخ به این فاکتور تغییر کرده و مورفولوژی گذشته ی خود را از دست می دهند این گمان می رود که این فاکتور های رونویسی در پاسخ به این فاکتور تغییر بیان داشته¬اند. در این طرح از تکنیک مقایسه ای Real-time PCR برای کمی سازی تغییرات بیان ژن های رونویسی مربوط به فرایند EMT و CDH1 استفاده شد. سپس از تکنیک بهبود زخم برای ارزیابی قدرت تحرک سلول ها بر اثر فاکتور CSF-1 استفاده گردید. در نهایت از تکنیک تشکیل کلنی در آگار نرم برای بررسی قدرت تومور زایی در شرایط معلق در پاسخ به دوز های مختلف CSF-1 استفاده گردید. نتایج مقایسه ایRT-PCR نشان می دهد که بیان ژن های Slug و MMP9 به طور معنی داری در غلظت های غیر فیزیولوژیک CSF-1 به ترتیب بیش از 3 و 1.5 برابر افزایش داشته است. اگرچه تغییراتی در سطح رونویسی ژن CDH1 در مجاورت با CSF-1 مشاهده نکردیم، مطالعه¬ی حاضر ما این پیشنهاد را می دهد که احتمالا Slug و MMP9 نقشی در افزایش خصوصیات تهاجمی این نوع سلول ها ایفا می کند. داده های ما همچنین نشان دهنده آن است که CSF-1 موجب افزایش زائده های سلولی و حرکت سلولی به کمک تشکیل لاملاپودیوم می گردد. فاکتور CSF-1 نیز
- Abstract
- Macrophage Colony Stimulating Factor (CSF-1) and its cognate receptor(c-fms) are overexpressed in more than 50 percent of reproductive malignancies such as breast, ovary, endometrium and prostate carcinomas. Simultaneous overexpression of these factors in cancers is also correlated with cancer progression, metastasis and consequently poor prognosis for patients. Previous studies indicated that CSF1R expressing carcinoma cells have deregulated and disrupted morphological characteristics which are associated with Epithelial Mesenchymal Transition. In the mentioned process, epithelial cells lose their epithelial characteristics, repress E-cadherin expression and acquire mesenchymal traits such as cell motility and elevated release of various extracellular factors such as matrix metalloproteinase. Several transcription factors are vital for this process and are thought to be overexpressed during early events of metastasis. Of these transcriptional factors, Snail, Slug, Twist and Zeb are known to be indispensible for this process. In this study, using the powerful technique of relative Real-time PCR, we assessed the expression profile of the aforementioned genes in BT-20 cells upon exposure to various doses of CSF-1 in starving condition. We also assessed the motility of these cells using wound healing assay. Finally, we used soft agar colony formation assay to determine anchorage dependency of these cells in response to various doses of CSF-1. Our results indicated that CSF-1 increases the expression level of Slug and MMP9 genes in the BT-20 breast cancer cell line, which is a CSF1R positive carcinoma model. These findings suggest that Slug and MMP9 may play an important role during cancer progression and metastasis of CSF1R positive carcinoma cells, together with uPA and uPAR. In addition, CSF-1 enhances motility and formation of cellular processes in BT-20 cells which may contribute to cancer progression. Moreover, soft agar data analysis showed that the mean size of
