عنوان پایان‌نامه
نازک کردن دیواره زوناپلوسیدا با لیزربرای بهبود باروری برون تنی در گاو
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 4918;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 53771
- تاریخ دفاع
- ۲۹ شهریور ۱۳۹۰
- دانشجو
- مرتضی صباغ زاده
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه
- چکیده
- هدف از این مطالعه بررسی اثر لیزر در نازک کردن لایه زوناپلوسیدا بر بلوغ هسته‌ای اووسیت‌های نابالغ گاو بود. تخمدان های گاو از کشتارگاه جمع آوری شده و در فلاسک در مدت یک ساعت به آزمایشگاه منتقل، و سپس به خوبی شست و شو داده شدند. مایع فولیکولی از فولیکول های 2 تا 6 میلی متر با سرنگ 20 خارج شده و سپس اووسیت های کومولوس دار (COC) جدا میشوند. در مرحله بعدی COC ها با محلول باروری شست و شو شده و اووسیت هایی که کومولوس منسجم تر و اوپلاسم همگن تر بودند در قطرات باروری قرار داده شد. محیط مورد استفاده محیط بلوغ TCM-199 است. سپس 10 اووسیت در هر قطره قرار داده و به مدت 24 ساعت در انکوباتور 5% دی اکسیدکربن، رطوبت 95% و دمای 39 درجه سانتیگراد قرارداده شد. پس از 24 ساعت اووسیت هایی که کومولوس از هم گسیخته دارند و به مرحله متافاز میوز II وارد شدند را زیر میکروسکوپ جدا و به صورت تصادفی به دوگروه تیمار برای لایه برداری لیزری (LA-IVF) و گروه شاهد (CA-IVF) تقسیم میشود. اووسیت های گروه یک (LA-IVF) را به صورت منفرد در پتری دیش قرار داده و با یک پیپت خلاء آن را مهار، و سپس با استفاده از لیزری با پهنای پالس ها کم انرژی و تیز در محدوده چند نانو ثانیه لایه برداری به قطر (5-6 میلیمتری) در لایه زوناپلوسیدا انجام شده برای سوراخ کردن هر اووسیت از محلی که بیشترین میزان وسعت حفره در آن قرار دارد لیزر به اووسیت تابانده شده گروه شاهد (CA-IVF) که بدون کومولوس است، نیز بدون هیچ گونه تغییری باقی می ماندند. اووسیت های تیمار شده با لیزر به محلول باروری انتقال یافته سپس آماده سازی اسپرم انجام شده و به محیط باروری اضافه گردیدند. بعد ازکشت سلول ها در مراحل 2، 4 و 8 سلولی بررسی شدند. نتایج بدست آمده بیان داشت که گروه تیمار شده با لیزر نسبت به گروه شاهد اختلاف معنی داری (P<0,05) نشان داد. افزایش 10% در تعداد سلولهای مراحل 2، 4، 8 سلولی حاکی از آن بود که برداشتن سد لایه ی زوناپلوسیدا از سر راه اسپرم میتواند در بهبود باروری آزمایشگاهی اثرگذار باشد. در این آزمایش همچنین پلی اسپرمی به عنوان یکی از عوامل بررسی گردید و نشان داده شد که در گروه تیمار نسبت به گروه شاهد افزایش این پدیده وجود داشته است.
- Abstract
- The objective of this study was to evaluate the effect of Zona pellucida thinning by laser on nuclear maturation of non matured cow oocyte. Cow ovaries gather from Slaughterhouse and transfer to the laboratory in an hour and then gently washed. Follicular fluid from follicles ranged between 2 to 6 mm removed by needle number 20 and then the oocytes cumulus (COC) were separated. Then The COC washed with a fertility solution and oocyte cumulus which were more heaped and had homogeneous Avplasm placed in fertility liquid. TCM-199 was the media which used. After that 10 ovocyte placed in each drop and incubated for 24 h with 5% CO2, 95% humidity and 39 degree of centigrade. After 24 h the oocytes which had fractured and entered to meiosis II Metaphase randomly separated in two group treatment for laser Zona pellucida thinning (LA-IVF) and control (CA-IVF). First group (LA-IVF) oocytes individually placed in Petri dish, and should be controlled by a vacuum needle, Then we use a sharp low-energy laser pulses with widths ranging from a few nanoseconds to peel thickness (5-6 mm) layer of Zona pellucida, to penetrate the Zona pellucida the laser beam should be aimed at the location that we have the largest area in the cell. The control group should remain without any treatment Oocytes treated by laser transmitted to fertility liquid and then sperms added to the liquid. After cultivation, cells were checked in stage 2, 4 and 8, Result revealed that, group which treated by laser compare to control had significant differences (P<0.05). 10% Increase in number of cells in stage 2, 4 and 8 in laboratory conditions showed that removing Zona pellucida could result in better fertilization In this study poly sperm was investigated too and over result suggested that this phenomena are more in treated group compare to control.
