عنوان پایان‌نامه
تاثیرروسکویتین در بلوغ ازمایشگاهی و میزان باروری اووسیت های نابالغ گوسفند
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 4469;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 49541
- تاریخ دفاع
- ۰۲ شهریور ۱۳۹۰
- دانشجو
- سلمان نصرالهی
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه, سعید زین الدینی
- چکیده
- هدف از این پژوهش، بررسی اثر روسکوویتین بر بلوغ هسته¬ای برون¬تنی و لقاح اووسیت‌های نابالغ گوسفند بود. روسکوویتین در غلظت¬های صفر، 25/6، 5/12، 25، 50 و 100 میکرومولار همراه با گروه شاهد به محیط کشت بلوغ افزوده شد. تخمدان‌های گوسفند از کشتارگاه جمع¬آوری و درون سرم فیزیولوژی به آزمایشگاه منتقل می‌شدند. توده¬های کومولوس- اووسیت از فولیکول¬های انترال با قطر 4-1 میلی‌متر، آسپیره شد. اووسیت¬ها پس از ارزیابی، 4 بار درون محیط کشت HEPES-TCM-199 که با 10% سرم جنین گاوی، 2/0 میلی¬مولار سدیم پیروات و 1 درصد پنی¬سیلین- استرپتومایسین مکمل¬سازی شده بود، شستشو داده شد و برای مدت 24 ساعت در انکوباتور با دمای ?C5/38، 5 درصد CO2، 20% اکسیژن و رطوبت بالای 90 درصد، در محیط کشت بلوغ، کشت داده شد. پس از 24 ساعت، ابتدا میزان پراکندگی سلول¬های کومولوس ارزیابی شد و پس از کومولوس‌برداری، اووسیت¬ها در هر تیمار برای تعیین وضعیت هسته¬ای رنگ¬آمیزی شد. در آزمایش دوم، بعد از 24 ساعت کشت اووسیت¬ها پس از شستشو در محیط کشت بلوغ بدون روسکوویتین برای تعیین اثر مهاری روسکوویتین برای 24 ساعت دیگر کشت داده شد و مجددا رنگ‌آمیزی شد. در آزمایش سوم اووسیت¬ها پس از 24 ساعت با اسپرم تازه گوسفندان بالغ بارور شد. یافته¬های این پژوهش نشان داد که روسکوویتین در غلظت¬های صفر، 25/6، 5/12، 25، 50 و 100 میکرومولار میزان پراکندگی و موکوسی‌شدن سلول¬های کومولوس را نسبت به شاهد افزایش نداد. همچنین روسکوویتین در غلظت 25/6 و 5/12 میکرومولار پس از 24 ساعت در محیط کشت تجاری TCM-199، بر بلوغ هسته¬ای اووسیت¬های نابالغ گوسفند با گروه شاهد اختلاف معنی¬داری نداشت (05/0
- Abstract
- The goal of this trial was to determine roscovitine on in vitro maturation and fertilization on ovine oocytes. Roscovitine was added in doses of 0, 12.5, 25 50 and 100 µM with control group to maturation culture. ovine oocytes were collected from slaughterhouse and transferred to laboratory with saline. The cumulus oocytes of antral follicles were aspirated with 1-4 mm diameters. The oocytes were washed in HEPES-TCM-199 culture supplemented with 2% fetal bovine serum, 2/0 µM sodium pyruvate and 1% penicillin-streptomycin after evaluating and were culture in mature culture in the incubator having 38.5 oC, 5 % CO2, 20% oxygen and humidity above 90 % for 24 hours. then, at first, it was evaluated cumulus cells and oocytes were strained for determination of nuclear situation after cumulus removing. In second stage, the oocytes were cultured for 24 hours, were cultured in the environment without ROS for determining inhibitory effect of treatment for 24 hours and were again strained. At next stage, these oocytes were fertilized by fresh ram semen. Results of this research indicated roscovitine did not increase expansion level and mucosal rate compared to control in Concentrations of 0, 25 / 6, 5 / 12, 25, 50 and 100 micro-molar. Roscovitine did not have significant difference on nuclear maturation when it was added in 6.25 micro-molar to culture (p<0.05). Nonetheless, the Concentrations of 5 / 12, 25, 50 and 100 could change nuclear maturation than control. All the trial treatments had the significant difference than 24 hour treatments. Also they could rich M-II phase (P<0.01). Treatments 6.25, 12.5 & 25 were selected to invitro fertilization. These obtained results indicate the oocyte affected by different doses of roscovitine, could make the better fertilization ability than control group. Key words: In Vitro Maturation&Fertilization, oocytes, Roscovitin, Cumulus Expansion, Nuclear Maturation, Sheep.
