عنوان پایان‌نامه
بررسی کاهش خصوصیات آلرژنی پروتئین بتالاکتوگلوبولین شیر توسط برخی کمپلکس های مس
- رشته تحصیلی
- بیوفیزیک
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 10968ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 51131
- تاریخ دفاع
- ۲۰ تیر ۱۳۹۰
- دانشجو
- ساجده ابراهیم دماوندی
- استاد راهنما
- علی اکبر صبوری
- چکیده
- چکیده آلرژی شیر گاو از شایعترین آلرژیها در نوزادان میباشد. بتالاکتوگلوبولین فراوانترین پروتئین آب پنیر به عنوان آلرژن اصلی شیر گاو مورد توجه قرار گرفته است. ساختار پایدار این پروتئین از تجزیه آن توسط پروتئازهای دستگاه گوارش حمایت میکند. تغییر در تاخوردگی پروتئین یا شکست جزئی آن منجر به افزایش پروتئولیز و کاهش آلرژنیسیتی میشود. کمپلکسهای فلزی به عنوان پروتئازهای مصنوعی مورد مطالعه قرار گرفتهاند. در مطالعه حاضر فعالیت پروتئازی چهار کمپلکس مس که سنتز و تعیین ساختار شدهاند با استفاده از روشهای مختلف مورد بررسی قرار گرفت. کمپلکسهای مس و بتالاکتوگلوبولین با زمانهای متفاوت انکوبه شده و تجزیه پروتئین بهوسیله ژل پلیاکریلامید آنالیز شد. حساسیت- زایی، فعالیت آنتیاکسیدانی و هیدرولیز برای نمونههای انکوبه شده با کمپلکسها در مقایسه با پروتئین بدون کمپلکس به- وسیله روشهای الایزا ، تعیین فعالیت آنتیاکسیدانی و فلورسانس مورد بررسی قرار گرفت. تغییرات ساختاری پروتئین، تحت برهمکنش با کمپلکس مس، بهوسیله روشهای فلورسانس، نورسنجی مرئی-فرابنفش و دورنگنمایی دورانی بررسی شد. هیدرولیز پروتئین انکوبه شده با چهار کمپلکس مس جدید بهوسیله کیموتریپسین با استفاده از فلورسانس بررسی شد. در مورد DLS روش پراکنش نور دینامیکی برای اندازهگیری قطر ذرات مورد استفاده قرار گرفت. دادههای ،DLS پروتئینهای انکوبه شده با دو کمپلکس مورد بررسی، ذراتی با قطر بزرگ را نشان میدهد. طیف فلورسانس نشان داد که کمپلکسهای مس به پروتئین متصل شده و نشر ذاتی فلورسانس را کاهش میدهند. نتایج مطالعات الایزای نمونههای انکوبه شده با کمپلکسها به مدت 30 ساعت با کمپلکسهای مس در مقایسه با پروتئین بدون کمپلکس حساسیتزایی کمتری نشان میدهند. همچنین نمونههای انکوبه شده فعالیت آنتیاکسیدانی بیشتری نسبت به پروتئین بدون کمپلکس نشان میدهند. کمپلکسهای فلزی، بهویژه کمپلکسهای مس، توانایی تغییر ساختار و یا شکست پروتئین را دارند. هنگامی که پروتئین هدف، آلرژن باشد، قطعه قطعه شدن و یا تغییر ساختمان پروتئین میتواند دسترسی پروتئازها را افزایش دهد. بنابراین کمپلکس مس به هیدرولیز پروتئین بهوسیله پروتئازها کمک کرده و موجب حساسیتزایی کمتر میشود. کلید واژه ها : بتالاکتوگلوبولین، خصلت پروتئازی، کمپلکس مس، حساسیتزایی شیر گاو، فعالیت آنتیاکسیدانی.
- Abstract
- Decreasing of allergic properties of BLG via different copper complexes Bovine milk allergy is the most prevalent allergies in infants. Beta lactoglobulin, BLG, the most abundant whey protein, is considered as the main allergen in bovine milk. The stable structure of BLG protects to degrade by gastrointestinal proteases. Modification in protein folding or its partial cleavage lead to enhancement of proteolysis and reducing allergenicity. Metal complexes are used as artificial proteases. In the present study, we have investigated the artificial protease activity of four new synthesized cooper complexes using different spectroscopic methods. The protein of ?-lactoglobulin is selected as a target. Copper complexes incubated with BLG at different incubation times to analyze the fragmentation of this protein by SDS-PAGE. Allergenicity, antioxidant activity and hydrolysis by chymotrypsin measured for incubated protein in comparison to protein without Cu complexes using ELISA , ABTS and fluorescence methods. Structural changes of the protein upon interaction with copper complexes have been followed by fluorescence, UV-Visible and circular dichroism (CD) methods. Hydrolysis of beta lactoglobulin compared with 30-hour incubated time with four new Cu complexes by chymotrypsin. DLS was used to detect particle size of proteins. Fluorescence spectra demonstrated Cu complexes bind to protein and quench instrinsic fluorescence emission. SDS-PAGE results approved Cu complexes able to cleave ?-lactoglobulin. Hydrolysed protein upon incubation with Cu complexes indicated antioxidant activity and less allergenicity in comparison to protein in absence of complexes. DLS data suggested complex 1 and complex 2 trigger protein aggregation and Nile red results revealed modification in tertiary structure upon different concentrations of Cu complexes. Metal complexes especially Cu complex able to modify protein structure or hydrolyses protein. While target protein is re
