عنوان پایان‌نامه
پایان نامه
- رشته تحصیلی
- زیست شناسی - علوم سلولی وملکولی
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس کیش شماره ثبت: 374;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 48850
- تاریخ دفاع
- ۱۷ تیر ۱۳۹۰
- دانشجو
- احسان قریب
- چکیده
- هدف ما از این مطالعه بررسی تاثیرات حفاظتی فاکتور نوروتروفیک GDNF و آنزیم ضد اکسیدان گلوتاتیون پروکسیداز-1 بر نورونهای دوپامین ساز بود. در این راستا ژن های مربوط به فاکتور نوروتروفیک GDNF و آنزیم ضد اکسیدان GPX-1 در سازه های ناقلین لنتی ویروسی قرار دادیم و با استفاده از سلول های HEK-293T بعنوان مولد، لنتی ویروس های نوترکیب را تولید کردیم. پس از مراحل تخلیص و تغلیظ، استوکی از ویروس های نوترکیب به نام های pLV-GDNF و pLV-GPX1 را بوجود آوردیم و به ترتیب سلول های آستروسیت و سلول های دوپامین ساز PC12 را با آنها آلوده کردیم. پس از اطمینان از افزایش بیان ژن های مذکور از طریق RT-PCR، محیط مشروط آستروسیت ها را به محیط کشت سلول های دوپامین ساز PC12 اضافه کردیم. پس از 24 ساعت نورون ها را با توکسین پارکینسون 6-OHDA مسموم نمودیم و تاثیر دو فاکتور فوق را بر بقاء آنها در برابر این مسمومیت با روش MTT Assay بررسی کردیم. آزمایشات ما افزایش پایداری نورون های نوترکیب در حضور توکسین را نشان داد و افزودن محیط شرطی آستروسیت های نوترکیب نیز باعث بقای نورون های طبیعی در برابر سم گردید. با توجه به نقش حمایتی آستروسیت ها برای نورون ها در سیستم عصبی مرکزی، روش ما می تواند به عنوان یک استراتژی حفاظت نورونی در درمان بیماری های نورودژنراتیو مطرح گردد.
- Abstract
- In this study our aim was Evaluation of protective effects of neurotrophic factor GDNF and anti-oxidant enzyme glutathione peroxidase-1 on dopaminergic neurons. We have inserted the cDNAs encoding GDNF and glutathione peroxidase-1 (GPX-1) into lentivirus vector backbones and have generated recombinant lentiviruses using HEK-293T line as producer cells. After purification and concentration steps, a stock of recombinant viruses named pLV-GDNF and pLV-GPX1 was produced that we used to transduce astrocytes and dopaminergic cell line PC12, respectively. After ensuring transgene expression, we have added the astrocytic conditioned medium to growing transduced neurons. Twenty four hours later, we have treated the neuronal cells with parkinsonian toxin 6-OHDA and examined its impact on cell survival via MTT viability Assay. Our experiments showed that in the co-presence of GDNFand GPX-1, dopaminergic neurons significantly resist 6-OHDA toxicity. Further evaluations indicated that when both factors are present glutathione levels are elevated whereas the levels of hydrogen peroxide as a source of free radicals are reduced. Considering the supportive roles of astrocytes in the central nervous system, our method can be presented as a neuroprotection strategy in therapy of PD and other neurodegenerative disorders.
