عنوان پایان‌نامه
تاثیرسرسوزن و شدتهای مختلف مکش اووسیت از تخمدان بر بلوغ آزمایشگاهی اووسیت گوسفند
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی- علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 4523;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 50683
- تاریخ دفاع
- ۱۳ تیر ۱۳۹۰
- دانشجو
- نوید داداش پوردواچی
- استاد راهنما
- سعید زین الدینی
- چکیده
- اولین قدم در راستای تولید آزمایشگاهی جنین، بازیافت اووسیت¬ها از تخمدان¬های بدست آمده از حیوانات کشتار شده می¬باشد. با توجه به ساختار حساس مجموعه کومولوس¬¬-¬¬اووسیت، حفظ سلامت و تمامیت ارتباطات سلولی موجود بین این مجموعه¬ی سلولی اهمیت ویژه¬ای دارد. با توجه به این¬که در هنگام بازیافت اووسیت¬ها از تخمدان، به کمک روش آسپیره کردن فولیکول¬ها، مجموعه سلولی کومولوس¬¬اووسیت فشار فیزیکی شدیدی را تحمل می¬نماید، لازم است بهترین شرایط برای بازیافت اووسیت¬ها از تخمدان فراهم شود. در این مطالعه تخمدان¬های گوسفند از کشتارگاه منطقه جمع¬آوری و در درون سرم¬فیزیولوژی با دمای -C?37 و 1 درصد پنیسیلین-استرپتومایسین، در مدت کمتر از 1 ساعت به آزمایشگاه منتقل شد. مجموعه¬های کومولوس-اووسیت از فولیکول¬های آنترال به روش آسپیره کردن جدا شد. به منظور انجام این آزمایش، از ترکیب سه فشارمکشی ml water/min(10، 15 و 20) و دو قطر سوزن G (¬16 و ¬20¬) جهت بازیافت اووسیت¬ها استفاده شد. در بخش اول آزمایش، تمام فولیکول¬های هر تخمدان و در دو بخش دیگر آزمایش، به ترتیب فولیکول¬های بالای 4 میلی¬متر و زیر 4 میلی¬متر مورد هدف قرار گرفت. اووسیت¬ها پس از ارزیابی 4 بار در درون محیط کشت 199HEPES-TCM- که با 2 درصد سرم جنین گاوی، 2/0 میلی¬مولار سدیم پیرووات و 1 درصد پنی¬سیلین-استرپتومایسین مکمل سازی شده بود، شستشو داده شدند. سپس حدود 10-5 اووسیت به هر قطره¬ی محیط کشت بلوغ، اختصاص یافت و برای مدت 24 ساعت در انکوباتور با دمای ¬C? 5/38، 5 درصد CO2 و رطوبت 95 درصد، کشت شدند. پس از 24 ساعت و بعد از کومولس برداری، وضعیت هسته¬ای اووسیت¬ها در هر تیمار با استفاده از اورسئین 1 درصد ارزیابی شد. یافته¬های حاصل از این پژوهش نشان داد که در تمامی گروه¬هایی که با فشار مکشی 10 میلی¬لیتر آب در دقیقه بازیافت شده بودند، نرخ اووسیت¬هایی که به مرحله متافاز-2 رسیده بودند نسبت به سایر گروه¬ها افزایش معنی داری نشان می¬دهد (05/0>p). هم¬چنین نرخ بازیافت اووسیت¬ها، برای تمامی گروه¬هایی که با فشار ml water/min 20 بازیافت شده بودند، به طور معنی داری نسبت به گروه¬هایی که با فشارهای ml water/min (10 و 15) بازیافت شده بودند بیشتر بود(05/0>p). نتایج این تحقیق نشان داد که قطر سوزن و اندازه¬ی فولیکول¬ها بر روی نرخ بلوغ اووسیت¬ها بعد از 24 ساعت کشت تاثیر معنی داری ندارد و این در حالی است که فشار حاصل از دستگاه خلاء، بیشترین تأثیر را بر روی نرخ بلوغ اووسیت¬ها بعد از 24 ساعت کشت اعمال می نماید و استفاده از فشار مکشی ml water/min 10 می تواند بهترین نتیجه را برای نرخ بلوغ اووسیت در بر داشته باشد.
- Abstract
- In vitro embryo production is needed to oocyte recovery from ovaries of slaughtered animals. Due to the sensitive structure of cumulus-oocyte complex (COCs) and the importance of preserving the integrity of cellular communication between these cells and oocytes recovered from ovarian follicles via aspiration method, COCs will withstand intense physical pressure; it seems to be necessary to investigate about the best condition for oocyte recovery from ovaries of slaughtered animals. In this study ovaries collected from the local abattoir were transported to the laboratory in saline with 1% peniciline/streptomycine at 37°C within 1 h. The oocytes of antral follicles were recovered by aspiration. The combination of 3 aspiration pressure (10, 15 and 20 mL H2O/min) and 2 different needled tip diameter were used for oocyte recovery. After preliminary evaluation, the oocytes with dark cytoplasm which surrounded with at least three compact layers of cumulus cells were selected and washed four times in HEPES-TCM 199 supplemented with 2% fetal bovine serum, 0.2mM sodium pyruvate, and 1% penicillin-streptomycine. Then 5-10 COCs were subjected to each droplet of maturation medium and incubated at 38.5°C, 5% CO2 and 95% humidity for 24 h. After 24 h incubation, the meiotic resumption rate were assessed, denuded oocytes were stained with 1% aseto orcein. Results showed the meiotic resumption rate significantly higher in oocytes which recovered via 10 mL H2O/min aspiration flow rate than all groups of experiment (p<0.05). The recovery rate was significantly higher in oocytes which recovered via 20 mL H2O/min aspiration flow rate (p<0.05).
