عنوان پایان‌نامه
انتقال ژن WNT۵a انسانی به دودمان های سلول های سرطان تخمدان انسانی SKOV۳ و OVCAR۳ : بررسی بقا و چرخه سلولی
- رشته تحصیلی
- زیست‌شناسی-علوم جانوری -فیزیولوژی جانوری
- مقطع تحصیلی
- کارشناسی ارشد
- محل دفاع
- کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: ۴۴۲۴;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 47520
- تاریخ دفاع
- ۳۰ بهمن ۱۳۸۹
- استاد راهنما
- زهراسهیلا سهیلی, قمرتاج حسین
- دانشجو
- نیلوفر منحصری
- چکیده
- سرطان تخمدان پنجمین سرطان کشنده مربوط به دستگاه تولید مثلی زنان می باشد. تحقیقات رابطه میان مسیر سیگنالینگ Wnt و سرطان تخمدان را نشان داده است. Wnt5a یکی از اعضای خانواده مولکول های Wnt بوده که توان بلقوه ای در پیشبرد سرطان تخمدان دارد. در این مطالعه هدف بررسی تاثیر افزایش بیان مولکول Wnt5a بر بقا و چرخه سلولی در دو دودمان سلولی Skov3 وOvcar3 است. در این راستا ، ژن Wnt5a کلون شده وبه داخل وکتور بیانی pIRES-EGFP که دارای پروموتور CMV و قطعات IRES وGFP می باشد. Skov3 وOvcar3 که از دودمانهای سلولی اپیتلیالی سرطان تخمدان میباشند با تراکم 80-70% توسط کیت Fugene HD ترنسفکت شدند. بیان GFP موفقیت ترنسفکشن تا 90% را نشان داد. سلول هایی که به طور Stable ژن را دریافت کرده اند توسط G418 با دوز کشنده جداسازی شدند. نتایج حاصل از RT-PCR نشان دهنده بیان بالای Wnt5a در سلول ها می باشند و انالیز های ایمنوسیتوشیمی و ایمنوفلورسانس حاکی از بیان درون هسته ای پروتئین Wnt5a می باشد. نتایج حاصل از فلوسایتومتری اختلاف معنا داری را میان سلول های ترنسفکت شده و ترنسفکت نشده نشان نداد اما تست MTT و شمارش سلول ها بقا 40%ی در سلول های Skov3 و 20%ی در Ovcar3 را در سلول های ترنسفکت شده نشان داده است. افزایش بقا مربوط به چسبندگی سلولها نبوده است و همچنین تست مهاجرت نشان از عدم دخالت Wnt5a در مهجرت سلولها می باشد. اما انچه قابل توجه است بیان بالاتر سیتوپلاسمی پروتئین Bax در سلول های ترنسفکت شده در مقابل سلول های ترنسفکت نشده می باشد. لذا، نتایج پیشنهاد کننده دخالت Wnt5a در مسیر anti-apoptotic می باشد که بررسی های مولکولی بیشتر این مطلب را تائید خواهد کرد. واژه های کلیدی : سرطان تخمدان ،Wnt signaling ،Wnt5a ، بقا و چرخه سلولی
- Abstract
- Abstract: Ovarian cancer is the fifth leading cause of death from cancer in women and is the leading cause of death from gynecological cancer. Investigations have shown the association between Wnt signaling and ovarian cancer. Wnt5a is one of molecules which were detected as a potential factor of progression in ovarian cancer. This study sought to determine the effect of Wnt5a overexpression on cell cycle and survival. In order to reach the aim, gene human Wnt5a(hWnat5a) was cloned and then inserted to a mammalian vector named pIRES-EGFP which harbors CMV promoter, IRES and GFP sequences. OVCAR3 and SKOV3 are the epithelial ovarian carcinoma cell lines which were chosen for the experiment and cultured in RPMI with 10% FBS.Transfection of cell lines were done by Fugene HD lipofection kit and the primitive success of the procedure was detected by the expression of GFP with florescence microscope. In order to select the stabled transfected cells, G418 antibiotics was used in a proper dose for one month. The result of RT-PCR , ICC,and IF confirmed the overexpression and localization of hWnt5a in the cell lines.MTT assay, migration assay, adhesion assay,and Flowsytometric assay which was done in 12h, 24h and 48h in a condition in which FBS was removed two hours after cell preparation. The result of MTT assay showed a remarkable increase in survival of transfected cell in compare to non-transfected cells in both cell lines. But, there was no significant differences between cell cycle, migration, and adhesion assay of transfected and non-transfected cells.Indeed, the result of ICC and IF showed the expression of Wnt5a in the nucleus of both cell lines and also high expression of Bax in non-transfected cells in compare to transfected ones. Our data shows that hWnt5a increase the survival and growth of these two ovarian cancer cell lines in a way which doesn’t affect cell cycle but influences apoptotic pathways. Key Words: Ovarian cancer; Wnt signaling ; Wnt5a; cell survival and cell cycle
