عنوان پایان‌نامه
بررسی غلضتهای مختلفFCS
- رشته تحصیلی
- مامایی و بیماری های تولید مثل دام
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 406 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 50034;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 406 ت
- تاریخ دفاع
- ۱۷ شهریور ۱۳۸۹
- دانشجو
- امین ابراهیمی
- استاد راهنما
- پرویز تاجیک, حمید قاسم زاده نوا
- چکیده
- هدف تکثیر سلول های بنیادی اسپر ماتوگونی گاو بالغ در محیط آزمایشگاه پس از هم کشتی با سلول های سرتولی و تاثیر غلظت های مختلفFCS بر کشت همزمان با استفاده از دو مرحله هضم آنزیمی تعلیق سلولی حاوی سلولهای ژرم و سر تولی از بیضه گاو بالغ به دست آمد. سلولهای اسپرماتوگونی با جدا سازی سلولهایبافت بینابینی? اسپرماتید، اسپرم ،اسپرماتوسیت و سرتولی خالص سازی شدند.سلولهای سرتولی بااستفاده از ظروف پوشیده از? میکروگرم برمیلیمتر لکتین داچورا استرامونییوم اگلوتینین(DSA)در بافر فسفات جدا شدند ماهیت سلول ها علاوه بر ریخت شناسی از طریق نشانگرهای اختصاصی4-octدر سلولهای کلونی های حاصل تایید شد پس از خالص سازی تعلیق سلولی حاوی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی به صورت هم کشتی با سلول سرتولی و افزودن فاکتور رشدFCS با غلظت های مختلف (0-5/2-5و10 درصد)کشت داده شد یک هفته پس از کشت سلولها پاساژ داده شد طول دوره کشت ? هفته بود و ارزیابی کلونی اندازه گیری قطر و شمارش تعداد کلونی در پایان هر هفته و با میکروسکوب نوری انجام گرفت یافته های پژوهش نشان داد که هم کشتی با سلول سرتولی به طور معنی داری باعث افزایش قطر و تعداده کلونی در محیط کشت می شود همچنین در بین گروه های تیمار شده با FCS با غلظت 10 درصد محیط کشت ، افزایش معنی داری را در قطر کلونی نسبت به گروه کنترل نشان داد .نتیجه گیری تکثیر سلولهای اسپرماتوگونی به کمک سیستم هم کشتی و افزودن فاکتور های رشدFCS راهی مناسب در افزایش تعداد سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی و کمک به درمان نا باروری است.
- Abstract
- In the present study, we examined the in vitro effects of co-culture with sertoli cells, different FCS concentrations on efficiency of spennatogonial cells colony formation. Both Sertoli and spermatogonial cells were isolated from adult bull testes by enzymatic digestion. The purification of spermatogonia was done after isolation of interstitial cells, spermatid, sperm, spermatocytes and sertoli cells. The isolation of sertoli cells was done with 5 Ilg/ml with Dathura Stratmonium Aglutinin (DSA) in PBS.In addition of morphology, the identity of the cells was confirmed through analysis of immunocytochemistry against oct-4 and isolated spermatogonial cells were treated either with various concentrations of FCS (0, 2.5,5,10 percent) with co-culture with sertoli cells during three weeks .First sub-cultured in the end of first week was occured. Colony assay with counts and square measure was done with using a light microscope at the end of the each week. The statistical significance between mean values was determined using one sample Kolmogorov- One-way Anova, p<0.05 was considered to be significant. Results indicated that FCS 10% was the best factor for in vitro colonization of adult bull spermatogonial cells compared with the other Concentrations. Coculture system with Sertoli cells was chosen as colonizer. Because coculture showed a significant increase in number and diameter of colonies in both treated and control groups .Also in 15th day of coculture after passage there was significant difference(p<0.05) between group with 5 percent FCS as a colony counts and square measurement with control and group with 2.5 percent FCS. Co-culture system and FCS 10% with sertoli cells increases adult spermatogonial cell colony formation and survival of the cells compared and showed significant in 10 percent concentration. Another results achieved that spermatogonial stem cell can be adapted with less than FCS 10% with continuing in culture specially in 5 percent.
