عنوان پایان‌نامه
پیوند سلولهای بنیادی جنین
- رشته تحصیلی
- کلینیکال پاتولوژی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 423 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 423 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46827
- تاریخ دفاع
- ۱۹ دی ۱۳۸۹
- استاد راهنما
- مسعود سلیمانی, زهره خاکی
- دانشجو
- نسیم بیگی بروجنی
- چکیده
- یکی از راهکارهای درمانی بالقوه برای درمان دیابت، درمان با استفاده از جایگزینی سلولها می باشد. در این مطالعه تأثیر پیوند سلول های بنیادی جنینی موشی القا شده به اندودرم و سلولهای پیش ساز کبدی در موشهای گروه آزمون مورد بررسی قرار گرفت. قبل از تشکیل اجسام شبه جنینی، سلولهای فیبروبلاست جنینی موشی از سلولهای بنیادی جنینی جداسازی شد. بعد از تشکیل اجسام شبه جنینی از سلول های بنیادی جنینی، القاء تمایز اجسام شبه جنینی به سلول های پیش ساز کبدی در دو مرحله انجام گرفت. در مرحله اول اجسام شبه جنینی در محیطی DMEM/F12 حاوی 10% سرم با افزودن دگزامتازون به میزان M7- 10 و انسولین به میزان g/mlµ 5 به مدت چهار روز کشت داده شدند و پس از آن در مرحله دوم، ادامه القای تمایز در محیطی DMEM/F12 حاوی 10% سرم با افزودن فاکتور (a-FGF) فاکتور رشد فیبروبلاستی به میزان ng/ml100، (HGF) فاکتور رشد هپاتوسیتی به میزان ng/ml20 و (OSM) انکوستاتین M به میزان ng/ml10 به مدت ده روز انجام شد. به منظور تایید هپاتوسیت بودن سلول های تمایز یافته، بیان ژنهای کبدی و همچنین بیان پروتئین های کبدی مورد ارزیابی قرار گرفت. 15 عدد موش ماده هیبرید نسل اول BALB/c×C57BL/6 با سن 4 تا 6 هفته در این مطالعه مورد استفاده قرار گرفت. 5 عدد موش به عنوان گروه آزمون (موشهای دیابتی تحت پیوند سلول)، 5 عدد موش به عنوان گروه کنترل (موشهای دیابتی بدون پیوند سلول) و 5 عدد موش نیز به عنوان گروه شاهد (موشهای غیر دیابتی بدون پیوند سلول) مورد مطالعه قرار گرفتند. سطح گلوکز خون، آزمون تحمل گلوکز داخل صفاقی مورد ارزیابی قرار گرفت و بررسی جزایر لانگرهانس پانکراس با استفاده از تهیه مقاطع بافتی مورد مشاهده قرار گرفت. به منظور ردیابی مهاجرت سلول های پیوندی، ایمنوهیستوشیمی با استفاده از آنتی GFP انجام شد، در ادامه از ایمنوهیستوشیمی آنتی انسولین برای ارزیابی حضور انسولین در جزایر لانگرهانس در موش های گروه آزمون استفاده گردید. نتایج در این مطالعه برای اولین بار نشان دادند که پیوند سلول های بنیادی جنینی القا شده به سلولهای پیش ساز کبدی، قادر به ترمیم جزایر لانگرهانس در موش های گروه آزمون می باشد. سطح گلوکز خون و آزمون تحمل گلوکز داخل صفاقی به طور چشم گیری در موش های دیابتی گروه تحت پیوند نسبت به موش های دیابتی گروه کنترل بهبود داشت. یافته ها حاکی از آن است که سلول های بنیادی جنینی القا شده به اندودرم و سلول های پیش ساز کبدی کاندید مناسبی برای باز سازی جزایر لانگرهانس پانکراسی در درمان دیابت نوع اول می باشد.
- Abstract
- Cellular replacement therapy is a potential therapeutic strategy for diabetes. In this study, we investigated the effect of transplantation of induced mouse embryonic Stem cell (mESC) into endoderm and early hepatic cells in test group mice. Before embryoid body formation, mouse embryonic fibroblast was isolated from ESCs. After embryoid body (EB) formation from mESC, the induction of EBs into early hepatocyte-like cells was done in two step. In first step, the EBs were cultured in DMEM/F/12 media supplemented with 10 % FBS, 10?7 M dexamethasone (DEX) and 5 µg/ml insulin for 4 days on bacteriologic culture dishes. In the second step the cells were cultured in DMEM/F12 supplemented with 10 % ES-FBS, 100 ng/ml acidic fibroblast growth factor), 20 ng/ml hepatocyte growth factor (HGF), and 10 ng/ml oncostatin M (OSM) on 0.1 % gelatinized cell culture dishes for 10 days. 15 In this study, 15 female reciprocal F1 hybrids of mating BALB/c×C57BL/6, 4 to 6 weeks old were used. 5 mice as test group (diabetic mice with cell transplantation), 5 mice as control group (diabetic mice without cell transplantation) and 5 mice as normal group (non-diabetic and without cell transplantation) were considered. Blood glucose levels and intra-peritoneal glucose tolerance (IGT) test were assessed. Observation of langerhance islets using tissue sections were assessed. The result revealed that transplantation of induced mESCs into early hepatic cells could repair langerhance islets of test group mice. Blood glucose levels and intra-peritoneal glucose tolerance test were significantly improved in cell transplanted mice compare to control group mice. Furthermore, there was significant increase in the number of langerhance islets in cell transplanted mice compare to control group mice. The findings declare that induced mESCs into endoderm and early hepatic cells, are appropriate candidate for regenerative therapy of langerhance islets in type I diabetes.
