عنوان پایان‌نامه
مطالعه بیومورفومتریک و بیولوژی مولکولی
- رشته تحصیلی
- انگل شناسی دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 418 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 46560;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 418 ت
- تاریخ دفاع
- ۲۹ آبان ۱۳۸۹
- استاد راهنما
- صادق رهبری, صدیقه ذاکری
- دانشجو
- زیور صادقی دهکردی
- چکیده
- بابزیوز یکی از بیماریهای مهم تک یاخته ای خونی منتقله از راه کنه می باشد که در گاو، گوسفند ، بز، نشخوارکنندگان وحشی و تک سمیها در اغلب نواحی جهان شایع است و عوامل مسبب بابزیوز گوسفندی در ایران، گونه های بابزیا اویس، بابزیا موتازی و بابزیا کراسا می باشند. این مطالعه در طی فصل فعالیت کنه ها در6 استان مختلف کشور (استان آذربایجان شرقی و غربی، خوزستان، خراسان شمالی، ایلام و مرکزی) که محل پرورش گوسفند بوده و طبق آمار گروه کنترل بیماریهای سازمان دامپزشکی کشور، بیماری بابزیوز در این مناطق گزارش شده بود انجام شد. اهداف این مطالعه عبارت است از: تعیین گونه های بابزیای گوسفندی جداشده از مناطق مختلف جغرافیایی ایران با استفاده از دو روش مرفوبیومتریک و روش نوین و حساس ملکولی؟ تعیین دو جدایه بزرگ و کوچک بابزیا اویس در ایران و پاسخ به این سوال که آیا گونه بابزیا موتازی در ایران وجود دارد؟ 154 نمونه خون از ورید وداج دامهایی که بی رنگی مخاطات و تب داشتند جمع آوری گردید. پس از تهیه گسترش خون از هر نمونه، میزان 5/2 میلی لیترخون حیوان مشکوک، به 5/2 میلی لیتر محلول آلسور اضافه شده و نمونه ها جهت بررسیهای بعدی، در زنجیره سرد به آزمایشگاه انگل شناسی دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران منتقل گردید. گسترش های خون در متانول، فیکس و به منظور تعیین حضور انگل تک یاخته ای، با گیمسا رنگ آمیزی شدند. سپس جهت تشخیص تفریقی جرمها، پارامترهای مرفولوژیک و بیومتریک شامل قطر بزرگ و کوچک، شکل و جایگاه انگل در هرگویچه قرمز مورد بررسی قرارگرفت. به منظور تایید گونه بابزیا در نمونه های جمع آوری شده، از تکنیکهای Semi nested- PCR , PCR استفاده گردید. براساس مشاهده میکروسکوپی برروی154 گسترش خون، (67/24%)38 مورد آلودگی به بابزیا و (26%)40 مورد آلودگی به تیلریا و (6/2%)4 مورد عفونت توام بابزیا – تیلریا تشخیص داده شد. مطالعه مرفولوژیکی گسترش های خونی آلوده نشان داد که از نظر جایگاه انگل درگویچه های قرمز، اختلاف وجود دارد : بطوریکه در حاشیه، حاشیه – مرکز و مرکز به ترتیب 71/61 % و 87/26% و 41/11% گزارش گردید. پارامترهای مرفومتریک بر اساس قطر بزرگ و کوچک، 6 نوع اندازه انگلی را مشخص نمود. ( اشکال کروی در دو اندازه 1و2 میکرومتر و اشکال گلابی در چهار اندازه 3×2، 2×5/2، 1×5/1، 2×5/1 میکرومتر .(از تعداد 154 نمونه خون ، با روش PCR و Semi nested-PCR (85/5%) 9 مورد آلوده به بابزیا، (53%) 81 مورد آلوده به تیلریا و (7/11%) 18 مورد مشکوک به عفونت توام بابزیا- تیلریا تشخیص داده شد. نتایج Semi nested-PCR نشان داد که محصول PCR، با پرایمراختصاصی بابزیا موتازی تکثیر نشد و فقط با پرایمراختصاصی بابزیا اویس تکثیر شده و اندازه سایز باند آن 186 جفت باز می باشد. نتایج آنالیزهای آماری نشان داد که حساسیت و ویژگی روش مرفوبیومتریک در مقایسه با روش ملکولی ، در تشخیص آلودگی بابزیا، به ترتیب 75% و 69/71% می باشد. همچنین حساسیت و ویژگی روش مرفوبیومتریک در مقایسه با روش ملکولی ، در تشخیص آلودگی تیلریا به ترتیب 75/46% و 22/97% می باشد. می توان نتیجه گرفت که در روش مرفوبیومتریک ، پلی مرفیسم در مورد بابزیا اویس وجود دارد که همین پلی مرفیسم سبب اشتباه در تشخیص تفریقی بابزیا اویس و بابزیا موتازی در روش رنگ آمیزی گیمسا می گردد که این مشکل ، با انجام PCR برطرف می شود. علی رغم همه حقایقی که گفته شد، پیروپلاسم تیلریا لستوکاردی دراکثر موارد، گرد تا بیضوی است ، که باید به عنوان یک مشکل در تشخیص تفریقی بین بابزیای کوچک گوسفند و تیلریا مدنظر قرارگیرد. بنظر می رسد در بسیاری موارد عوامل مسبب بابزیوز که با رنگ آمیزی گیمسا، بابزیا اویس تشخیص داده می شوند، تیلریا لستوکاردی می باشند.
- Abstract
- Ovine babesiosis is the most important haemoparasitic tick-borne disease of small ruminants in in Iran caused by B. ovis, B. mutasi and B. crassThe study was conducted during the tick activity seasons in six different sheep rearing provinces where the ovine babesiosis was recorded by the Parasitic Diseases Control Group of Veterinary Organization as indigenous disease (Eastern Azerbaijan, Western Azerbaijan, Khouzestan , Northern Khorasan , Eillam and Central). 2.5 ml blood samples were collected from jugular vein into the labeled vessels containing of 2.5 ml Alsevers solution prior to the thin blood smear preparation. Generally, 154 blood samples collected from animals which demonstrated the pale mucous membranes or hyperthermia; the specimens were transferred to the parasitological laboratory of veterinary faculty in Tehran for further analysis. The fixed blood smears in methanol stained with Giemsa in order to determine of the presence of haemoprotozoal parasites. Then the morphological and biometrical parameters including the long and short axis, shape and site location of parasite in any infected erythrocyte have been considered for differential diagnosis. Extracted DNA from each blood samples were used in PCR and Semi nested- PCR in order to confirm the presence of the species.Microscopical observation on 154 blood smears determined 38 (24.67%) and 40 (26%) samples were infected by Babesia and Theileria, respectively. The mixed infections occurred in 4 (2.6%) samplesMorphological study of infected blood smears showed different occurrence of parasite site location in erythrocytes, marginal, sub marginal and central were determined as 61.71%, 26.87%, 11.41% , respectively, morphometrical parameters recognized on the basis of long and short axis determined seven types of measurement sizes. The size of typical paired pyriforms with acute angle was with mean of 1-1.5?2 micrometer (?m) and with obtuse angle was mean of 3?2 ?m. The round forms also in different sizes were detectable, for example 1?1 and 2?2 ?m. The PCR product of Babesia species and Theileria species is, 389- 402 bp and 426- 430 bp .The results of Semi nested-PCR showed that the PCR product could not be amplified with the primers specific for B. mutasi, but, the amplificatin could only be revealed by primers specific for B. ovis that detected 184bp PCR product. The results of statistical analysis can be emphasized that the sensitivity and specificity of molecular biology method as compared with morphometrical method, in order to determined Babesia infection were 75% and 71.69% , respectively. The sensitivity and specificity of molecular biology method, as compared with morphometrical method, in order to demonstrated Theileria infection were 46.75 % and 97.22 % , respectively. It can be concluded that the biometrical polymorphisms could exist with in B. ovis in Iran. This polymorphism could be a main problem in differentiation between B. ovis and B. mutasi by Giemsa staining, which could be dissolved by specific PCR analysis. Despite of all the facts which considered, the piroplasms are of Theileria lestoquardi being round to oval in the majority of cases, it should be considered as a problem in differentiation between small ovine Babesia and Theileria. It seems that the causative organism of many cases of Babesiosis which identified B. ovis by Giemsa staining, could be Theileria lestoquardi .
