عنوان پایان‌نامه
انتقال ژن GFPبه سلولهای اسپرماتوگونی گوساله با استفاده از لیپوزومی و پلیمرهای کاتیونی
- رشته تحصیلی
- مامائی و بیماریهای تولید مثل دام
- مقطع تحصیلی
- دکترای تخصصی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 575 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 62560;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 575 ت
- تاریخ دفاع
- ۱۷ اسفند ۱۳۹۲
- دانشجو
- گلشید جاودانی شاهدین
- استاد راهنما
- پرویز تاجیک
- چکیده
- زمینه مطالعه:در بالغین، سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی(SSCs) تنها سلولهای بنیادی هستند که قادر به انتقال اطلاعات ژنتیکی به نسل بعد می‌باشند. با در نظر گرفتن این که یک SSC منفرد می‌تواند به تعداد زیادی از اسپرماتوزوآ تبدیل شود، دستکاری ژنتیکی این سلول‌ها یک تکنولوژی نوین با کاربردهای عملی در گونه‌های مختلف حیوانی را مهیا می‌سازد. هدف: در این مطالعه ارزیابی انتقال ژن Enhanced Green Fluorescent Protein(EGFP) به کلونی‌های اسپرماتوگونی گاوی از طریق حامل لیپوزومی Lipofectamine و حامل پلی مر کاتیونیک Turbofect و بدست آوردن بهترین روز انکوباسیون در جذب ژن توسط کلونی‌های اسپرماتوگونی بررسی شد. روش کار: کارایی انتقال ژن خارجی EGFP به SSCs از طریق Lipofection وTurbofect در سه روز از شروع کشت کلونی‌های اسپرماتوگونی (روز4، 6 و8) توسط میکروسکوپ فلورسنت ارزیابی شد. توسط رنگ آمیزی ایمنوسیتوفلورسنت علیه مارکرهای OCT4 و Vimentin، ماهیت SSCs و سلولهای سرتولی نیز تایید شد. نتایج : نتایج نشان داد که کلونی‌های ترانسفکت شده از طریق Lipofectamine و Turbofect در هر سه روز انجام ترانسفکشن در مقایسه با گروه‌های شاهد به طور معنی داری افزایش یافت. (05/0>p). کلونی‌های ترانسفکت شده در مقایسه با گروه‌های بدون حامل ژن خارجی نیز بالاتر بود (معنی دار) یافته‌های این بررسی در تعیین بهترین روزی که بیشترین میزان جذب پلازمید در کلونی‌های اسپرماتوگونی وجود داشته باشد نشان داد که پیک فاز رشد لگاریتمی سلول‌ها در زمان ترانسفکشن دارای اهمیت فوق العاده‌ای می‌باشد. در مقایسه با سه روز، در روز 4 کشت بیشترین میزان ترانسفکشن در هر دو آزمون مشاهده شد که به پیک فاز رشد لگاریتمی سلول‌ها اشاره دارد . نتیجه گیری نهایی: نتایج بدست آمده از این مطالعه پیشنهاد می‌کند که Lipofectamine و Turbofect هر دو می‌توانند به منظور انتقال مستقیم DNA خارجی به کلونی اسپرماتوگونی به ویژه در روز 4 کشت به صورت ایمن به کار رود.
- Abstract
- BACKGROUNDS:Spermatogonial Stem Cells (SSCs) are the only stem cells in adults that can transfer genetic information to future generations. Considering that a single SSC gives rise to a vast number of spermatozoa, genetic manipulation of these cells is a potential novel technology with feasible application to various animal species. OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) gene transfection into bovine spermatogonial colonies via liposome carrier and Turbofect carrier and assess the best incubation day in uptake exogenous gene by spermatogonial colonies. METHODS: Transfection efficiency EGFP gene through lipofection and Turbofect was determined different three days(day 4, 6 and 8) after the beginning of the culture by fluorescent microscope Immunofluorescent staining against OCT4 and vimentin led to the confirmation of the nature of both SSCs and sertoli cells. RESULTS: Results showed that the transfected colonies through lipofection and Turbofect increased significantly (p<0.05) in each three days of transfection in comparison with those of the control groups. The transfection colonies were higher (significant) in comparision with those of the free exogenous gene carrier groups.The results of this survey in determine the best day that we have the most rate of plasmid absorption into spermatogonial colonies showed that the peak of cell logarithmic phase in th time of transfection is consequentional. In comparision with these three days, the rate of infected colonies was higher when transfection proceed at day 4. CONCLUSIONS: It was concluded that lipofectamine and Turbofect can be used safely for direct loading exogenous DNA to spermatogonila colony particulary during the fourth day of culture.
