عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر مولکولی مهارگر گیرنده نوروکینین۱(NKIR)در سلول های لوسمی لنفوبلاستی حادNalm-۶
- رشته تحصیلی
- بیوشیمی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77233;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11542ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77233;کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11542ب
- تاریخ دفاع
- ۲۲ آبان ۱۳۹۵
- دانشجو
- سمانه بیاتی
- استاد راهنما
- شهین احمدیان
- چکیده
- مطالعات گسترده ای فعالیت غیرطبیعی مسیر (NK1R) Neurokinin-1 receptorرا به عنوان یکی از شاخصه های سلول-های سرطانی معرفی می نمایند. به همین دلیل استفاده از آنتاگونیست های NK1R در سال های اخیر به عنوان سازوکاری برای درمان سرطان مطرح می باشد. در بیماران ALL با توجه به اینکه سلول های پیش ساز لنفوئیدی 3 تا 4 برابر بیان NK1R بیشتری نسب به سلول های لنفوسیت طبیعی دارند استفاده از آنتاگونیست های NK1R می تواند مؤثر باشد. Aprepitant آنتاگونیست انتخابی NK1R می باشد که به عنوان یک داروی هدفمند مورد توجه قرار گرفته است. اگرچه خاصیت کشندگی Aprepitant در بسیاری از سلول های سرطانی مشخص شده است اما مکانیسم مولکولی آن هنوز ناشناخته است. در این مطالعه مکانیسم مولکولی Aprepitant را در رده سلولی pre-B ALL Nalm-6 مورد بررسی قرار گرفته است. اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوتیک Aprepitant توسط تست های MTT، تریپان بلو، Brdu و Annexin-V مورد ارزیابی قرار گرفت. توزیع سلول ها در چرخه سلولی، فعالیت کاسپاز 3 و نیز میزان تولید ROS داخل سلولی اندازه گیری شد. هم چنین برای یافتن مکانیسم مولکولی این مهار کننده، میزان بیان mRNA ژن های مرتبط با آپوپتوز نیز توسط تکنیک Rq-PCR آنالیز و برخی ژن های درگیر در مسیر سیگنالینگ با روش وسترن بلات بررسی شد. نتایج نشان می دهد که مهار مسیر NK1R باعث کاهش میزان بقاء و تکثیر سلول ها می شود و همچنین کاهش نسبت فسفریلاسیون phosto/total Akt میگردد که در نتیجه کاهش رشد سلولی را در پی دارد. در ادامه نتایج نشان می دهد که این مهارکننده NK1R با تحت تاثیر قرار دادن مسیر وابسته p53 Akt/ باعث القاء آپوپتوز می شود و تاثیری روی مهار مسیر NF-?B ندارد. داروی Aprepitant با فعال کردن مسیرهای وابسته به پروتئین سرکوب گر تومور p53 و افزایش میزان بیان ژن های p21 و p27 باعث توقف چرخه سلولی در مرحله G1 می گردد. از سوی دیگر p53 با افزایش میزان رونویسی از ژن-های پروآپوپتوتیک Bad، Bax و PUMA ، مسیر آپوپتوز وابسته به کاسپاز 3 را در سلول های Nalm-6 فعال می نماید. به علاوه به نظر می رسد که این دارو با افزایش تولید داخل سلولی ROS و افزایش بیان ژن p73 باعث فعال شدن ژن فاکتور رونویسی FOXO3a گردیده است که آن هم با فعال کردن پروتئین های آپوپتوزی وابسته به مسیر p53 در سلول های Nalm-6 که دارای ژن wild-type p53 هستند، باعث القاء آپوپتوز می گردد. در نهایت نتایج نشان داد که داروی Aprepitant می تواند اثر ضدتکثیری داروی دوکسوروبیسین که دارویی مرسوم در درمان بیماران ALL است را تشدید نماید و به این ترتیب با جلوگیری از روند تکثیر سلول ها باعث القاء مرگ سلولی بیش تری در سلول های نام برده شود. در کل به خاطر آنکه Aprepitant اثرات ضد سرطانی مطلوبی را در Nalm-6 از خود نشان داده است، می تواند به عنوان یک داروی امیدبخش در درمان لوسمی لنفوبلاستیک حاد در نظر گرفته شود. هرچند برای پی بردن به مکانیسم عملکرد این دارو و سلامت آن برای بیماران سرطانی به بررسی های بیش تر از جمله مطالعات کارآزمایی بالینی نیاز می باشد. کلید واژه ها: سلول Nalm-6، گیرنده نوروکینین 1، لوسمی لنفوبلاستیک حاد، p53 ، Aprepitant
- Abstract
- Increasing number of genetic and cancer biology studies indicated a prominent role for neurokinin-1 receptor (NK1R) in cancer cell growth and survival. Considering the fact that neoplastic lymphoid precursors in acute lymphoblastic leukemia (ALL) carry a three- to four-fold NK1R expression as compared to normal lymphocytes, using NK1R antagonist seems to be noteworthy in the treatment of ALL patients. In this study, we found that inhibition of NK1R with aprepitant, a selective high-affinity antagonist of the human NK1R, exerts cytotoxic and anti-proliferative effects against pre-B ALL-derived Nalm-6 cells either as single drug or in combination with doxorubicin. Our data showed that treatment of the cells with the inhibitor resulted in apoptotic cell death, at least partly, through abrogation of PI3K/Akt pathway, as revealed by the reduction of phospho/total Akt ratio. In agreement with the inhibitory effect on Akt, we also found that aprepitant increased the expression level of p21 and p27, which in turn leads to the induction of G1 cell cycle arrest. Overall, this study recommends mechanistic pathways by which inhibition of NK1R can augment apoptotic cell death through a plausible p53-dependent pathway rather than NF-?B-depended mechanism in pre-B ALL cells; however, further studies are needed to better characterize the application of NK1R inhibition in clinical cancer treatment. Keywords: Acute lymphoblastic leukemia; Aprepitant; p53; Nalm-6 cells; Neurokinin-1 receptor.
