عنوان پایان‌نامه

ارتباط Wnt۵a با التهاب القا شده در دودمان سلولی سرطان تخمدان: بررسی فاکتورهای رونویسیNF-kBو Stat۳



    دانشجو در تاریخ ۰۴ آذر ۱۳۹۴ ، به راهنمایی ، پایان نامه با عنوان "ارتباط Wnt۵a با التهاب القا شده در دودمان سلولی سرطان تخمدان: بررسی فاکتورهای رونویسیNF-kBو Stat۳" را دفاع نموده است.


    رشته تحصیلی
    زیست‌شناسی-علوم جانوری - تکوینی جانوری
    مقطع تحصیلی
    دکتری تخصصی PhD
    محل دفاع
    کتابخانه پردیس علوم شماره ثبت: 5858;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71836
    تاریخ دفاع
    ۰۴ آذر ۱۳۹۴
    دانشجو
    سمیه عرب زاده
    استاد راهنما
    قمرتاج حسین
    چکیده
    لینک فایل چکیده
    Wnt5A یکی از اعضای خانواده پروتئین های Wnt است. این مولکول در فرآیندهای التهابی شرکت داشته و در سلول های سرطان تخمدان نیز افزایش بیان نشان داده است. تحقیقات پیشین نشانگر فعالیتWnt5A از طریق اتصال مستقیم و یا غیر مستقیم به ROR2 به عنوان یک گیرنده تیروزین کینازی برای پیام رسانی مسیر غیر قانونمند Wnt بوده است. تاکنون نقش Wnt5A/ROR2 در التهاب وابسته به سرطان تخمدان بررسی نشده است. اهداف این مطالعه عبارتند از : 1. بررسی اثر عوامل التهابی مانند LPS, LTA, IL-6, IL-1?, TNF?, IFN? و همچنین مسیر های پیام رسانی NF-?B و STAT-3 بر میزان بیان Wnt5A/ROR2 ، 2. بررسی دخالت Wnt5A/ROR2در مهاجرت و تهاجم سلول ها و 3. بررسی تغییر ترشح سایتوکین ها/کموکین ها در دودمان¬ سلولی سرطان تخمدان انسانیSKOV-3 ترنسفکت شده با SiRNA علیه .Wnt5A نتایج ما نشانگر کاهش بیان Wnt5A به صورت وابسته به زمان در حضور مهارکننده های مسیر NF-?B و STAT-3 بود. در حالیکه فقدان بیان ROR2 در حضور مهارکننده STAT-3 پس از 48 ساعت مشاهده گردید. اکثر میانجی های التهابی موجب افزایش mRNA Wnt5A 8 ساعت پس از تیمار در مقایسه با کنترل شدند. اثر القایی اکثر عوامل التهابی بر افزایش بیان Wnt5A در حضور مهارکننده STAT-3 در مقایسه با کنترل کاملا ملغی شد. در حالیکه تنها اثر فزاینده برخی عوامل التهابی مانند IL-6, IFN? و IL-1? بر بیان Wnt5Aدر حضور مهارکننده NF-?B در مقایسه با کنترل کاهش یافت. از میان میانجی های التهابی LPS, LTA و IL-6 بیان ROR2 را پس از 48 ساعت در این سلول ها افزایش دادند. افزایش بیان القا شده ROR2 توسط LPS و LTA نیز در حضور مهارکننده STAT-3 در مقایسه با کنترل ملغی شد. توانایی مهاجرت سلول ها در حضورWnt5A siRNA در مقایسه با کنترل 67% کاهش یافت(P<0.05). همچنین کاهش 80 درصدی مهاجرت سلولی نیز در حضور آنتی بادی خنثی کننده ROR2 در سلول های ترنسفکت شده با Wnt5A siRNA مشاهده شد. آنالیز Cytokine array نشان داد که ترشح GCSF, GM-CSF, IL-1?, IL-2, IL-13 و MCP-3 در سلول های ترنسفکت شده با Wnt5A siRNA ملغی(P<0.001) ولیکن میزان ترشح RANTES و IL-7 افزایش نشان داد (P<0.05). در مجموع نتایج این مطالعه برای اولین بار نشان داد که عوامل التهابی موجب افزایش بیان Wnt5A/ROR2 از طریق مسیرهای پیام رسانی NF-?B وSTAT-3 در دودمان سلولی انسانی سرطان تخمدان SKOV3 می شوند. همچنین این مطالعه اولین گزارش مبنی بر نقش تنظیمی Wnt5A روی ترشح سایتوکین ها و کموکین ها درSKOV-3 و دخالت آنها در مهاجرت سلول های SKOV-3 است. بنابراین به نظر می رسد هدف گیری مسیر Wnt5A/ROR2 می تواند به عنوان یک ابزار درمانی در سرطان تخمدان مطرح باشد.
    Abstract
    Wnt5A is a member of non-transforming Wnt protein family implicated in inflammatory processes and is highly expressed by ovarian cancer cells. ROR2, a member of the Ror-family of receptor tyrosine kinases, acts as a receptor or co-receptor for Wnt5A. To date the role of Wnt5A/ROR2 in inflammation associated with ovarian cancer remains unknown. The aims of this study were 1. Study the effect of inflammatory mediators such as LPS, LTA, IL-6, IL-1?, TNF? and IFN??on Wnt5A/ROR2 expression in relation to NF-?B and STAT-3 pathways in SKOV-3 cell line, 2. Assessment of Wnt5A/ROR2 role in migration/invasion of SKOV-3 cells and 3. Cytokine array analysis of Wnt5A knocked-down SKOV-3 cells compared to control. There was a significant decrease of Wnt5A expression in the presence of STAT-3 and NF-?B inhibitors in a time-dependent manner. While, ROR2 expression was decreased after 48h treatment with STAT-3 inhibitor. Also, there was an increased Wnt5A mRNA levels after 8 hours of treatment with most of the inflammatory mediators. The effect of most of these mediators on Wnt5A expression was abrogated in the presence of STAT-3 inhibitor. While, IL-6, IL-1? and IFN? induced Wnt5A expression was abrogated in the presence of both NF-?B and STAT-3 inhibitors. LPS, LTA and IL-6 induced ROR2 expression by 48h. However, LPS- or LTA-induced ROR2 were abrogated only in the presence of STAT-3 inhibitor. Moreover, cell migration in Wnt5A knocked-down SKOV-3 cells was decreased by 67% compared to control (P<0.01). Further blockage of ROR2 activity led to 80% decreased cell migration (P<0.01). In addition, inflammatory cytokines such as GCSF, GM-CSF, IL-1?, IL-2, IL-13, MCP-3 were decreased, while, IL-7 and RANTES were increased in cultured media from Wnt5A knocked-down cells compared with control cells. In conclusion, this study revealed for the first time that inflammatory mediators modulates Wnt5A/ROR2 through NF-?B and STAT-3 transcription factors which may play a role in ovarian cancer cell migration. Moreover, Wnt5A plays an immunomodulatory role as it regulates cytokines/chemokines sectertion by SKOV-3 cells. Thus, our results may provide new insight for Wnt5A/ROR2 targeting in ovarian cancer treatment. Key Words: Inflammation, Ovarian cancer, Wnt5A, NF-?B, STAT-3, Migration/Invasi