عنوان پایان‌نامه
تولید برون‌تنی رویان در سامانه همکشتی با سلول‌های اپیتلیال جدا شده از قطعات مختلف اویداکت گوسفند
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی - علوم دامی - فیزیولوژی دام
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 7155;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77748;کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 7155;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 77748
- تاریخ دفاع
- ۰۱ اردیبهشت ۱۳۹۵
- دانشجو
- سعید دشتی
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه, حمید کهرام
- چکیده
- چندین رخداد فیزیولوژیکی مهم در اوایل رشد و تکامل رویان در اویدکت رخ می دهد. اکنون بخوبی اثبات شده که بین رویان های اولیه و سلول های اپی تلیال اویدکت یک دیالوگ قوی وجود دارد. برای چندین سال به منظور بهبود تولید برون تنی رویان، اثر استفاده از سلول های سوماتیک از طریق همکشتی با رویان ها بررسی شده است. این مطالعه با اهداف پیشرو انجام گردید: 1- آیا سلول های اپی تلیال مشتق شده از قطعات آمپولا و ایسموس اثرات متفاوتی بر روی تولید برون تنی رویان دارد. 2- آیا استفاده از قطعات مختلف ایسموس در سامانه همکشتی پی در پی، با هدف شبیه سازی حرکت رویان در شرایط درون تنی، تولید برون تنی رویان را بهبود می دهد. 3- آیا سرعت تشکیل و توسعه بلاستوسیست در سامانه های مختلف همکشتی مطابق با دوره حضور رویان در اویدکت تسریع می گردد. نتایج مطالعه حاضر اثرات مثبت و تخصصی سلول های اپی تلیال مشتق شده از ناحیه ایسموس در مقایسه با ناحیه آمپولا روی مراحل اولیه رشد و تکوین رویان های گوسفندی در شرایط برون تنی را نشان می دهد (45/42±4/01 درصد در مقایسه با 4/75±36/62درصد برای بلاستوسیست های توسعه یافته و 1/00±18/26 درصد در مقایسه با 2/75 ±10/22درصد برای بلاستوسیست های تفریخ شده) (P? 0/05). استفاده از سلول های اپی تلیال مشتق شده از ناحیه ایسموس در مقایسه با ناحیه آمپولا بطور معنی داری منجر به افزایش درکل تعداد سلول های بلاستوسیست گردید (290/88±68/76سلول در مقایسه با 55/65±190/22سلول) ( P? 0/05. سرعت تشکیل بلاستوسیست بطور معنی داری در سامانه همکشتی با استفاده از سلول های اپی تلیال ناحیه ایسموس در مقایسه با ناحیه آمپولا افزایش یافت (3/05±25/62 درصد در مقایسه با 1/00±12/42درصد برای تولید بلاستوسیست در روز 6 بعد از لقاح). در تیمار همکشتی با سلول های اپی تلیال ایسموس میزان بلاستوسیست هایی که در مدت 8 ساعت پس از اتساع مجدد هچ شدند (2/02±31/42)، در مقایسه با سایر تیمارها و نسبت به گروه کنترل به طور معنی داری بالاتر بود ((P? 0/05. همچنین میزان بلاستوسیست هایی که در مدت 24 ساعت پس از اتساع هچ شدند، در سامانه های همکشتی در مقایسه با گروه شاهد بطور معنی داری بالاتر بود ((P? 0/05. ما برای اولین بار متوجه شدیم که سلول های اپی تلیال اویدکتی نقش تخصصی ویژه ای در تولید برون تنی رویان همانند شرایط درون تنی بر روی دوره زمانی رشد و توسعه رویان و سرعت تشکیل بلاستوسیست دارد.
- Abstract
- Several critical physiological procedures occurred in oviduct during early embryo development.It is now well documented that in vivo there exist a great cross talk between early embryos and oviductal epithelial cells. For many years, the use of somatic cells for coculture with embryos has been investigated to improve in vitro embryo production (IVEP). The objectives of this study was to investigate; i) whether ampullary and isthmic derived epithelial cells have different effects on IVEP, ii) if by using different segments (3 equal segments) of isthmus in a sequential coculture system, we could improve IVEP outcomes, and iii) whether the different coculture systems accelerate the kinetics of blastocyst development. Results of the present study confirmed the positive and highly specialized effects of isthmic compare to ampullary derived epithelial cells on in vitro early development of ovine embryos (45.42%±4.01vs. 36.62%±4.75 expanded blastocysts, 18.26%±1.00 vs. 10.22%±2.75 hatched blastocysts). Using isthmic derived epithelial cells as feeder cells in a coculture system compare to ampullary led to a significant (P < 0.05) increase in the total cells number of blastocysts (290.88±68.76 vs. 190.22±55.65). The kinetics of blastocyst development showed a significant increase in coculture system using isthmic epithelial cells as the feeder cells compare to ampullary derived epithelial cells (25.62%±3.05 vs. 12.42%±1.00 blastocysts at day 6). Results showed that using different segments of isthmus in a sequential coculture system as the feeder cells did not improve the IVEP parameters concerning development or kinetic. In coculture system with isthmic derived epithelial cells, blastocyst rate that hatched within 8 hours after re-expanded was significantly higher compared with the other groups (P<0.05). the percentage of hatched blastocysts within 24 hours after re-expanded was significantly higher in coculture systems compared with the control group (P < 0.05). In conclusion, we found for the first time that oviductal epithelial cells play the highly specialized role in vitro same as their in vivo counterparts in terms of development rate and kinetic. Keywords: Oviduct, IVEP, Coculture, Ampullary, Isthmic, Ovine
