عنوان پایان‌نامه
استفاده از سامانه همکشتی با بکارگیری سلولهای اپیتلیال اویداکت گوسفند در مراحل مختلف تولید برون تنی رویان گوسفند
- رشته تحصیلی
- علوم دامی - فیزیولوژی دام - تولیدمثل
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 6542;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71431
- تاریخ دفاع
- ۰۱ مهر ۱۳۹۴
- دانشجو
- نوید داداش پوردواچی
- استاد راهنما
- احمد زارع شحنه, حمید کهرام
- چکیده
- نقش محوری اویداکت به عنوان محل بلوغ نهایی زوناپلوسیدا، لقاح، و تکوین ابتدایی رویان نکته ای است که در دو دهه اخیر کاملا به اثبات رسیده است. هدف از این پژوهش بررسی تاثیر احتمالی سلول های اپیتلیالی ناحیه آمپولا و ایسموس اویداکت گوسفند بر میزان سخت شدن زوناپلوسیدا، کاهش زمان لقاح برون تنی و بررسی کیفیت رویان های تولید شده به کمک این روش می باشد. همچنین در بخش پایاینی مطالعه به بررسی تاثیر احتمالی فصل سال و روش مورد استفاده به منظور بازیافت اووسیت بر بازده تولید برون تنی رویان پرداخته می شود. نتایج نشان داد که استفاده از سامانه همکشتی با بکار گیری سلول های اپیتلیال اویداکت استخراج شده از ناحیه آمپولای اویداکت به طور معنی داری (p < 0.05) منجر به افزایش زمان هضم آنزیمی زوناپلوسیدا شده که به عنوان شاخصی جهت ارزیابی سختی زوناپلوسیدا مورد استفاده قرار می گیرد. همچنین مشخص شد که با استفاده از سامانه همکشتی زمان استاندارد انجام رویه لقاح برون تنی به 4 ساعت کاهش یافت که این کاهش در زمان لقاح برون تنی درنهایت منجر به هیچ کاهش معنی داری (p < 0.05) در کیفیت رویان های تولید شده نشد. نتایج آزمایش مشخص کرد که بهترین زمان برای تولید برون تنی رویان در گوسفند فصل تولید مثلی می باشد که توانست به طور معنی داری کیفیت و نرخ تولید برون تنی رویان را افزایش دهد. در نهایت مشخص شد که بهترین روش برای استخراج اووسیت از تخمدان های با منشا کشتارگاهی روشهایی می باشند که کمترین آسیب را به مجموعه کومولوس اووسیت وارد کرده و درحقیقت تمایت لایه های سلولی کومولوس را دستخوش تغییرات و فشار فیزیکی ننماید. در این مورد بین 2 روش متداول بازیافت اووسیت که شامل برش دادن سطح تخمدان و آسپیره نمودن فولیکول های می باشد روش برش دادن سطح تخمدان ها بازده بهتری داشت.
- Abstract
- The central role of oviduct as the site of zona pellucida (ZP) maturation, fertilization and early embryogenesis has been recognized. The objective of this study was to investigate; whether ampullary and isthmic derived epithelial cells have different effects on in vitro ZP hardening, in vitro fertilization (IVF), and in vitro culture of resulted embryos (IVC), if the standard duration of IVF reduced to 4 and 6 h without any reduction in the rate of embryo development, and evaluate the effect of oocytes recovery method and the possible seasonal influence on the embryo production yield. Cumulus oocyte complexes (COCs) matured in a coculture system with ampullary/isthmic epithelial cells, conditioned media produced using ampullary (ACM), isthmic (ICM), and drops of TCM199 (control) for 24 h. The matured oocytes were randomly divided in two groups. Group I, was subjected to ZP digestion. Group II, was undergone IVF. Duration of ZP digestion in a coculture system with ampullary epithelial cells (AE) was significantly (p < 0.05) increased compared with other groups. Penetrated oocytes and monospermic fertilization were significantly (p < 0.05) increased in AE group. Mean number of spermatozoa per penetrated oocytes was reduced dramatically for AE group (p < 0.05). A significant (p < 0.05) increase in the embryo development observed in all treated groups compared to control. Results revealed that epithelial cells harvested from ampullary segment of oviduct has its in vitro specialized role on ZP hardening, subsequent IVF and IVC outcomes. Results showed that gametes coincubation time successfully reduced to 4 h compare to other treatments. The third experiment showed that the optimum season for performing IVC would be the breading season for ovine. Also the oocyte recovery technique significantly influenced on IVC outcomes. Between slicing and aspiration method we can suggest the slicing as the most efficient method in term of embryo quality not in term of number of reco
