عنوان پایان‌نامه
تقویت سیگنال لومینسانس جهت ردیابی ویروس هپاتیت
- رشته تحصیلی
- بیوشیمی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک شماره ثبت: 11424ب;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 69998
- تاریخ دفاع
- ۰۱ مهر ۱۳۹۴
- دانشجو
- مصطفی شوریان
- استاد راهنما
- هدایت اله قورچیان
- چکیده
- ایمنوحسگرها یکی از ابزارهای ویژه برای تشخیص آنتی ژنها هستند که اهمیت آن در عملکرد اختصاصی آن ها نسبت به آنتی ژنها است. از ایمنوحسگرها به طور گسترده در زمینه های پزشکی، داروئی و امنیت غذایی استفاده می شود. در طول دهه گذشته به شیمی لومینسانس بر پایه سنجش ایمنی توجه زیادی شده است زیرا دارای ویژگی هایی مانند حساسیت بالا، گستره تشخیصی وسیع، سیگنال زمینه پایین و فناوری ساخت آسان می باشند. روش های ایمنوحسگری از نوع لومینسانس مبتنی بر آنتی بادی، مشتقات لومینول و نانوذرات طلا به همراه کاتالیزورهای مختلف، جهت تشخیص آنتی ژن استفاده می شود. طرح های گوناگونی وجود دارد که هر کدام توانستند بخش هایی از تقویت سیگنال نوری را به واسطه نانوذرات طلا افزایش دهند. لذا برای تشخیص و ردیابی هپاتیت B از این روش ها استفاده شد. به دلیل استفاده از دو دسته آنتی بادی شامل پلی کلونال و منوکلونال، قدرت تشخیص انتخابی این روش نسبت به سایر روش های مشابه افزایش یافته است. در این پژوهش، نشانگری از نانوذرات طلا به قطر حدود 18 نانومتر طراحی و ساخته شد که حامل تعداد زیادی مولکول لومینول و تعداد اندکی بیوتین است. در این طراحی، از بیوتینی استفاده شده است که نسبت به مولکول های دیگر طول بیشتری را دارد. این مزیت باعث شده که بیوتین متصل به نانوذره طلا، راحت تر در دسترس استرپتواویدین قرار گیرد که این خود گامی در تقویت سیگنال شیمی لومینسانس می باشد. در نهایت این نانوذره، به عنوان نشانگر از طریق بیوتین به آنتی بادی ثانویه اصلاح شده با استرپتواویدین متصل می شود. از طرفی، استرپتواویدین دارای 4 جایگاه اتصال برای بیوتین است و این موجب می شود که به ازای هر استرپتواویدین کانژوگه به آنتی بادی، حداکثر 4 نانوذره به واسطه بیوتین به آن متصل شود. این گامی دیگر در افزایش تقویت سیگنال شیمی لومینسانس است. فرآیند کار بدین ترتیب است که ابتدا پلیت های 96 تایی پلی استیرن با آنتی بادی اولیه پوشیده شده، و سپس به آن ها، آنتی ژن اضافه گردید. پس از انکوباسیون شستشوی چاهک ها انجام گرفت و به منظور تکمیل ساندویچ ایمنی، آنتی بادی ثانویه اصلاح شده با استرپتواویدین به چاهک ها افزوده شد. پس از شستشوی مجدد نانوذرات طلای حامل لومینول و بیوتین، به ساندویچ ایمنی اضافه گردید. پس از شستشوی نهایی، در حضور کاتالیزور و پراکسید هیدروژن، نشر شیمی لومینسانس
- Abstract
- The immuno-sensors are a special device for detecting antigens. That importance is in the specific application to antigens. Immune-sensors were applied in medical science, medicine industry and food protection. Chemiluminescence based on immunoassay has received considerable attention over recent decades due to its scientific and technological importance to clinical analysis, bioanalysis, environmental measurements and biomolecule trace detection. The characteristics such as acceptable sensitivity, wide dynamic ranges, low background signal, no radioactive pollution and easy preparations could also be considered as other advantages of this technique. Among the immune-sensor techniques based on antigen, luminol-H2O2 system, gold nanoparticles (GNPs) and different catalyst were used to recognize antigens. It is well known that GNPs have played important role in signal amplification, due to their easy surface modification, chemical stability and bio-compatibility. There are different patterns, each can increase some parts of signal amplification of chemiluminescence because of GNPs, so to recognize and detect hepatitis B. These methods are used because of the function of so called antibodies including polyclonal and monoclonal. The selection power of this method is much higher than other methods. In this research a label from GNPs with 18 nm diameter and a novel nano-lable was designed based on covalent attachments of luminol and little biotins on the surface of GNPs. Also, long biotin molecules on GNPs facilitated the accessibility of binding to streptavidin (STV). The attachment of STV to Ab2 can amplify the immunosensor signal due to STV multi-binding sites. When STV is covalently attached to the Fc region of anti-HBsAg antibody, it can provide one, two, three or even four different binding sites for the biotin-GNP-luminol. Therefore it improves the sensitivity via multi connections of Ab2 to HBsAg. In the present report a strategy based on a sandwich type immuno
