عنوان پایان‌نامه
( مطالعه اثر ضد میکروبی پپتیدهای نو ترکیب Ib-Amp۴ و E۵o-۵۲ الحاقی به پلی پپتید نانو)
- رشته تحصیلی
- مهندسی کشاورزی - بیوتکنولوژی کشاورزی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 7396;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 81095;کتابخانه مرکزی پردیس کشاورزی و منابع طبیعی شماره ثبت: 7396;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 81095
- تاریخ دفاع
- ۲۶ تیر ۱۳۹۶
- دانشجو
- شهره فهیمی راد
- استاد راهنما
- سیدهادی رضوی
- چکیده
- علاقه به تحقیق در مورد محصولات جدید با خاصیت ضد میکروبی در حال افزایش است. پلیمرهای ضدمیکروبی یکی از مطمئن ترین روش ها برای سرکوب میکروب ها هستند. در این پایان نامه، توانایی بتاکازئین، یکی از مهم ترین پروتئین های خوداتصالی شیر با قدرت بالای تشکیل فیلم های پلیمری، به عنوان یک عامل اتصالی به پپتیدهای ضدمیکروبیIb- AMP4 و E50-52 بررسی شد. همچنین، اثرات ضدمیکروبی پروتئین-های نوترکیب BCN-Ib-AMP4 و BCN- E50-52 روی عوامل میکروبی فاسد کننده غذا اندازه گیری شد. سازه های نوترکیب pET21a- BCN-Ib-AMP4 و pET21a- BCN- E50-52 به E. coli BL21 (DE3) منتقل شدند وبیان پروتئین تحت شزایط بهینه سازی شده انجام گرفت. پروتئین های تخلیص شده از ستون کروماتوگرافی نیکل، تحت شرایط بهینه سازی شده دیالیز بازآرایی شدند و به وسیله اولترافیلتراسیون به غلظت µg/ml 1600 رسیدند. آزمون های ضد میکروبی علیه Escherichia coli, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Aspergillus flavus و Candida albicans انجام شد. نتایج آزمون های ضد میکروبی کارایی BCN-Ib-AMP4 و BCN- E50-52 را علیه میکروارگانیسم های مورد آزمون تأیید کرد. در کل، ترکیب تیمول با BCN-Ib-AMP4 و تیمول با BCN-E50-52 خواص ضد میکروبی آنها را افزایش داد. مقادیر MIC، MBC، MFC، FICI و FBCI اثر هم-افزایی بالای بین تیمول و پروتئین¬های نوترکیب مورد آزمون را تأیید کرد. مطالعات منحنی رشد و زمان کشتن، کاهش ناگهانی تعداد سلولهای زنده در ساعت اولیه تیمار را نشان داد و نتایج SEM اثرات تخریب شدید BCN-Ib-AMP4 و BCN- E50-52 در ترکیب با تیمول روی سلول های باکتریایی را تایید کرد.
- Abstract
- There is a growing research interest on products with antimicrobial activity. Antimicrobial polymers are one of the most surefire procedures to combat microbes. In the present study, the ability of ?eta-casein- one of the milk major self- assembly proteins with high polymeric film production capability- as a fusion partner of Ib-AMP4 and E50-52 antimicrobial peptides was investigated. Also, the antimicrobial activities of ?eta-casein- IbAMP4 and BCN- E 50-52 fusion proteins against common food pathogens were assessed. The pET21a-BCN- Ib-AMP4 and pET21a- BCN- E 50-52 constructs were transformed to E. coli BL21 (DE3), and protein expression was induced under optimized conditions. Purified proteins obtained from nickel affinity chromatography were refolded under optimized dialysis circumstances and concentrated to 1600 µg/mL fusion proteins by ultrafiltration. Antimicrobial assays were performed against Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Aspergillus flavus and Candida albicans. Results of Antimicrobial tests confirmed the efficiency of BCN-IbAMP4 and BCN- E50-52 against tested microorganisms. Overall, the combination of thymol plus BCN-IbAMP4 and BCN- E50-52 increased their antimicrobial activities. MIC, MBC, MFC, FICI and FBCI values showed strong synergistic activity between thymol and two examined recombinant protein. Time–kill and growth kinetic studies indicated a sharp reduction of cell viability during the first period of exposure, and SEM results validated the severe destructive effects of recombinant BCN-IbAMP4 and BCN- E50-52 in combination with thymol on bacterial cells. Keywords: Antimicrobial activity, Beta casein, E50-52, Ib-AMP4, Synergism, Thymol
