عنوان پایان‌نامه
مقایسه زنوتایپنیک جرایدهای میکروسپوروم کانیس و ارزیابی پلی مورفیسم آنها قبل و بعد از تیمار
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3450;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 58188;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3450
- تاریخ دفاع
- ۰۴ اردیبهشت ۱۳۹۲
- دانشجو
- شبنم شفیعی لیالستانی
- استاد راهنما
- علیرضا خسروی
- چکیده
- میکروسپوروم کانیس یکی از عوامل رینگ ورم یا درماتوفیتوزیس میباشد. این قارچ حیوانگرا بوده و در بسیاری از موارد، آلودگی گربهها با این قارچ احتمال این بیماری در انسان و حیوانات را افزایش میدهد. میکروسپوروم کانیس در اثر کشت متوالی به آسانی خصوصیات مورفولوژیک خود را از دست میدهد. انگشت نگاری مولکولی میتواند برای تشخیص هویت دوباره مورد استفاده قرار گیرد. همچنین RAPD-PCR برای تشخیص سریع درماتوفیتها در سطح ژنتیکی و تکمیل روشهای آزمایشگاهی موجود جهت بهبود تشخیص درماتوفیتهای انسانی فراهم شده است. چون تفریق درماتوفیتوزیس به علت گونههای متفاوت به طور بالینی مشکل است، به همین خاطر استفاده از تکنیکهای آزمایشگاهی سریع و صحیح برای تشخیص درماتوفیتها جهت درمان اولیه و کنترل آن اهمیت دارد. در این مطالعه 10 جدایه میکروسپوروم کانیس جدا شده از سگ، گربه، انسان، خرگوش و روباه در آزمایشگاه قارچ شناسی دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران در محیط سابورود دکستروز آگار در دمای30 درجه سانتیگراد به مدت سه هفته نگهداری شد و سپس میسلیومهای رشد یافته آنها به دو محیط مایع سابورود دکستروز براث منتقل شدو کشتها به مدت یک ماه در دمای 30 درجه سانتیگراد انکوبه گردیدند. یکی از این دو محیط بعد از کمی رشد، تحت تأثیر اسانس آویشن قرار گرفت. بعد از گذشت 5 روز از تأثیر اسانس، DNA نمونههای مربوطه استخراج گردید. برای انجام روش RAPD-PCR از بافر استاندارد PCR و همچنین 4 پرایمر با توالی نوکلئوتیدی اتفاقی با نامهای OPU 15 و OPU 13 و OPD 18 و OPA 04 استفاده شد. محصولات RAPD-PCRبر روی ژل 5/1درصد آگارز الکتروفورز شده و به وسیله رنگ اتیدیوم بروماید در مقابل اشعه UVمورد بررسی قرار گرفتند. نهایتاً درخت فیلوژنیک و جدول ضریب تشابه سویه ها رسم گردید. نتایج نشان داد که باندهای مشترک در بین جدایهها وجود دارد و همچنین باندهای اختصاصی در هر جدایه قابل تمایز است. با اثر دادن اسانس آویشن شیرازی در محیط کشت، تغییرات ژنتیکی در حدی بود که اساساً جدایههای تحت تأثیر آویشن نسبت به جدایههای اولیه در شاخههای دیگر قرارگرفتند که بیانگر اثرات عمیق اسانس بر آنها میباشد. جهت ارزیابی اثرات آویشن شیرازی در سطح ژنتیکی و هدف اختصاصی این اسانس بر روی ژنهای خاص، این مطالعه با تعداد بیشتری از جدایهها و با روشهای پیشرفتهتر مولکولی در آینده باید صورت پذیرد.
- Abstract
- Microsporum canis is zoophilic fungus and it is an important agent of dermatophytosis. According to some reports, Microsporum canis can survive on hair and skin of cats without any clinical symptoms. As a result, infected cats spread the infection in human and other animals; actually they act as an important reservoir. This fungus loses their morphologic characteristics easily because of subculture; therefore RAPD-PCR was applied for the differentiation of the isolates. Also, RAPD-PCR was provided for the rapid identification of dermatophytes at the genetic level and supplementing the existing laboratory methods for improving the diagnosis of human dermatophytosis. Clinically, it is too difficult to differentiate dermatophytosis caused by various species, so using of rapid and accurate laboratory techniques for identifying the dermatophytes is important for early treatment and control of the isolates In this study 10 Microsporum canis isolates was detected in cats, dog, human, fox and rabbit were kept in sabouraud?s dextrose agar at 30?c for 3 weeks at the Mycology Laboratory of Veterinary Faculty of Tehran University. The grown myceliums were cut from the agar and transferred to 2 sabouraud?s dextrose broth media; they were incubated at 30?c for 1 month. When a little growth of mycelium was seen, one of two cultures was exposed by essence of Zataria multiflora Boiss. After five days using essence, the grown mycelial in both broth cultures, were washed with deionized water and pestled by liquid nitrogen and then DNA was extracted. For running the RAPD-PCR, PCR set system and 4 random primers OPU 15, OPU 1, OPD 18, OPA 04 were used. PCR products were separated by electrophoresis in 1/5 % agarose gel for 1/5 hours at 80 voltages in TBE 0/5 X buffer. RAPD-PCR products were detected by staining with ethidium bromide and visualized under UV light. Then phylogenetic tree and similarity coefficient table was drawn. The results showed that there were some same bands between Microsporum canis isolates. There were some specific bands for each isolates, as well. There were genetic changes after using essence of Zataria multiflora in culture medium. As results of this study, these isolates were in different branches in comparison with initial isolates. These outcomes demonstrated the profound effects of the essence. In order to evaluate the effect of Zataria multiflora at the genetic level and special aim of this essence on specific genes, This study should be continued into the future by using more Microsporum canis isolates and more advanced molecular methods.
