عنوان پایان‌نامه
تاثیراسانس گیاه زنیان برشکل گیری بیو فیلم و ژنهای موثر بر آن در جدایه های دهانی کاندیدا آلبیکنس بیماران HIV+
- رشته تحصیلی
- قارچ شناسی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 561 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 561 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 61168
- تاریخ دفاع
- ۰۱ دی ۱۳۹۲
- دانشجو
- عقیل شریف زاده
- استاد راهنما
- علیرضا خسروی
- چکیده
- کاندیدا آلبیکنس تمایل زیادی به رشد و تشکیل بیوفیلم بر روی تجهیزات پزشکی و سطوح مخاطی دارد. این بیوفیلم ها به عوامل ضد قارچی معمول مقاوم هستند. امروزه روش های جدیدی به منظور جلوگیری از تشکیل و همچنین ریشه کنی توده های بیوفیلمی پیشنهاد شده است. افزایش آگاهی از خطرات مرتبط با استفاده از عوامل آنتی بیوتیکی منجر به شتاب در تحقیقاتی شده است که از گیاهان دارویی و اسانس آن ها به عنوان منابع جدیدی از ترکیبات ضد میکروبی یاد می کنند. با توجه به آنکه بیوفیلم های کاندیدا آلبیکنس به عنوان فاکتور مهمی در حدت و بیماری زایی این مخمر شناخته شده اند، این مطالعه با هدف ارزیابی فعالیت ضد کاندیدایی اسانس گیاه زنیان بر روی سلول های آزادزی و بیوفیلمی جدایه های کاندیدا آلبیکنس مربوط به حفره دهانی افراد ایدزی انجام شد. در این مطالعه به منظور ارزیابی اثر اسانس زنیان بر کینتیک رشد، ساختار 3 بعدی و همچنین اثرات مهاری و تخریبی آن بر روی بیوفیلم های ایجاد شده توسط جدایه های کاندیدا آلبیکنس ، از روش های مولکولی، احیای نمک تترازولیوم و میکروسکوپ الکترونی نگاره استفاده شد. همچنین به منظور بررسی اثر اسانس بر روی ژن های اتصال ALS1 و EAP1 ، جدایه ها تحت تیمار با غلظت های مختلف اسانس قرار گرفته و RNA آن ها استخراج گردید. سپس میزان بیان این دو ژن با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و تکنیک RT-PCR تعیین شد. در این مطالعه رشد بیوفیلم ها بر روی سطوح پلی استیرنی در طی 48 ساعت به اوج خود رسید. پس از آن رشد تا 72 ساعت نسبتاً ثابت مانده و بعد از 72 ساعت میزان رشد شروع به کم شدن کرد. میکروسکوپ الکترونی با توجه به ریخت شناسی سلولی و آرایش فضایی، تفاوت های ساختاری زیادی را در بین جدایه های تحت مطالعه بدون در نظر گرفتن میزان مقاومت آن ها به فلوکونازول نشان داد. اسانس زنیان دارای اثرات ضد کاندیدایی بر روی شکل آزادزی و پلانکتونیک تمامی جدایه های تحت مطالعه بود. به طوریکه حداقل غلظت ممانعت از رشد اسانس بر روی سلول های آزادزی معادل 340 میکروگرم در میلی لیتر در جدایه های مقاوم و حساس وابسته به دوز و 300 میکروگرم در میلی لیتر در جدایه های حساس به فلوکونازول بود. درحالیکه حداقل غلظت ممانعت از رشد اسانس بر روی سلول های بیوفیلمی معادل 1200 میکروگرم در میلی لیتر در جدایه های مقاوم و960 میکروگرم در میلی لیتر در جدایه های حساس و حساس وابسته به دوز بود. نتایج نشان دادند که اسانس زنیان مطابق الگویی وابسته به دوز منجر به مهار بیان ژن های ALS1 و EAP1 می شود. نتایج این مطالعه بیانگر اثرات قوی اسانس دانه گیاه زنیان بر سلول های پلانکتوونیک و توده های بیوفیلمی کاندیدا آلبیکنس است.
- Abstract
- Candida albicans has a high propensity to develop biofilms on medical devices and mucosal surfaces that are resistant to traditional antifungal agents. Increasing awareness of hazards associated with the use of antibiotic agents has accelerated investigations into plants and their essential oils as new sources of antimicrobial agents. Recently, novel approaches for prevention and eradication of the biofilm are suggested. As C.albicans biofilms are known to be important factors underlying its virulence and pathogenicity, the aim of this study was to investigate anticandidal activity of Trachyspermum ammi essential oil on planktonic and biofilm cultures of oral C.albicans strains isolated from HIV+ individuals. We used molecular tools, the colorimetric MTT assay and scanning electron microscopy (SEM) coupled with software analyses to evaluate the growth kinetics, architecture, inhibition and reduction in biofilms formed from understudy isolates. Total RNAs of C.albicans that treated with different concentration of T.ammi essential oil were subjected to reverse transcription polymerasechain reaction (RT-PCR). Specific primers of ALS1 and EAP1 genes were used. Over all, Biofilm growth on polystyrene substrates peaked within 48 h. after which growth remained relatively stable up to 72 h. When it began to decline. Scanning electron microscopy revealed structural differences for biofilms regardless of their resistance to fluconazole with respect to cell morphology and spatial arrangement. T. ammi essential oil showed anticandidal activity against C. albicans isolates in both suspension (average of minimum inhibitory concentration-MIC- 340 µg/ml for resistance and dose dependent isolates and 300 µg/ml for sensitive isolates) and biofilm (sessile minimum inhibitory concentration -SMIC-1200 µg/ml for resistance isolates and 960 µg/ml for sensitive and dose dependent isolates) .The results indicated that T. ammi essential oil inhibited the expression of adhesion genes(ALS1 and EAP1) by a dose dependent manner. This study demonstrated that T. ammi essential oil has excellent antifungal activity against biofilm or planktonic cultures of oral C. albicans isolates. T. ammi essential oil was able to inhibit biofilm formation and kill yeast cells in preformed biofilms.
