عنوان پایان‌نامه
جداسازی اووسیتهای کریپتواپیوریدیوم پاردوم از نمونه های مدفوع گوساله با روشهای مبتنی بر شناورسازی
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3427;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 55226;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3427
- تاریخ دفاع
- ۰۸ آذر ۱۳۹۱
- دانشجو
- زینب اصغری
- استاد راهنما
- پرویز شایان, الهه ابراهیم زاده آبکوه
- چکیده
- کریپتوسپوریدیوم پارووم تک یاخته ای مشترک بین انسان و حیوان می باشد، که در افراد دچار نقص ایمنی و نوزاد حیوانات بخصوص گوساله ها بیماریزا می باشد. اووسیست های دفع شده از دامهای آلوده باعث آلودگی محیط بخصوص منابع آبهای سطحی می شود. با توجه به این که حتی تعداد کم اووسیست می تواند آغازگر بیماری باشد و از طرف دیگر اووسیست ها به ضدعفونی کننده های متداول مقاومند این تک یاخته مورد توجه محققین قرار گرفته و همواره تلاش شده است روشهای جداسازی و تخلیص اووسیست های کریپتوسپوریدیوم حتی در نمونه های محیطی دارای تعداد کم اووسیست بهینه شود و اووسیست هایی کاملا خالص و عاری از آلودگی های باکتریایی و سایر ناخالصی ها به منظور مطالعات ایمنولوژیکی و مولکولی فراهم گردد. روشهای مختلفی که تا کنون استفاده شده اند تا حدودی موفقیت آمیز بوده اند ولی هیچیک نتوانسته اند به اووسیست عاری از باکتری دست پیدا کنند. در این تحقیق به منظور جداسازی اولیه ی اووسیست های کریپتوسپوریدیوم ابتدا چهار روش شناورسازی شامل استفاده از محلول نمک طعام، محلول ساکارز، شیب غلظتی پلکانی فایکول و محلول ساکارز 55 درصد استفاده گردید. محلول ساکارز 55 درصد بهترین روش برای جداسازی اولیه ی اووسیست های کریپتوسپوریدیوم ارزیابی گردید. جهت حذف باکتری و سایر ناخالصی های همراه از فیلتر نیتروسلولز (با منافذ 3 میکرون) استفاده گردید. هرچند اووسیست های حاصل از فیلتراسیون عاری از هرگونه باکتری بود ولی تعداد زیادی (70 درصد) از اووسیست ها در این روش از دست رفت. فیلتراسیون در مواردی که تعداد اووسیست نمونه کم باشد قابل استفاده ارزیابی نگردید. سپس در تحقیق حاضر ستون کروماتوگرافی متشکل از سفارز 4B متصل شده به آنتی بادی ضد اووسیست کریپتوسپوریدیوم پارووم برای تخلیص اووسیست های کریپتوسپوریدیوم پارووم استفاده شد. ستون مورد استفاده 000،50 اووسیت کریپتوسپوریدیوم پارووم را از محلول ورودی جدا نمود. اووسیست های حاصل شده در بررسی میکروسکوپی و کشت باکتریایی کاملا خالص و عاری از باکتری بودند. این روش حتی در مواردی که تعداد اووسیست کم باشد قابل استفاده ارزیابی گردید.
- Abstract
- Cryptosporidium parvum is a zoonotic protozoa which cause disease especially in immunocompromised patients and calves. The oocysts excreted by infected animals may infect water sources. Because oocyst can cause infection even in low number and there were not any effective disinfectant for it, researchers pay much more attention to this zoonotic protozoa and try to establish different methods to improve isolation and identification of C. parvum oocysts even in environmental samples with small number of oocysts, to obtain much purified oocysts for immunological and molecular studies. Up to now different methods catch some success but can’t represent completely pure oocysts. In order to isolate the C. parvum oocysts four flotation methods have been used, which include NaCl floatation, sucrose floatation, ficoll gradient and 55% sucrose floatation. A floatation method based on 55% sucrose was evaluated as the best method for the primary isolation of Cryptosporidium oocytes. The nitrocellulose filter (with 3µm pore size) was used to remove bacteria and other impurities. Although the oocysts from the filtration was free from bacteria, but many (70%) of the oocysts were lost in this way. Filtration is not applicable in the case of low number of oocysts in samples. Then in this study the chromatography column contains 4B sepharose bound with antibody against C. parvum oocysts has used for isolation of C. parvum oocysts. The capacity of column to isolate C. prvum oocysts was determined as 50,000 oocysts. The separeted oocysts were completely pure and free from bacteria on microscopic examination and bacterial culture. It seems that this method could be applicable for isolation of oocysts from samples with low number of oocysts.
