عنوان پایان‌نامه
تشخیص تفریقی و همزمان مایکوپلاسما سینوویه و مایکو پلاسما گالی سپتیکوم به روش PCR دوگانه بر روی نمونه های بالینی
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3382;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 58616
- تاریخ دفاع
- ۲۵ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- هانیه طاهری
- استاد راهنما
- سیدمصطفی پیغمبری
- چکیده
- چندین مایکوپلاسما قادر به ایجاد مایکوپلاسموزیس در طیور میباشند. از جمله مهمترین آنها مایکوپلاسما گالی سپتیکوم (MG) و مایکوپلاسما سینوویه (MS) میباشد. MG و MS به عنوان از جمله اصلی ترین عوامل بیماری زای پرندگان، خسارات اقتصادی فراوانی را به صنعت مرغداری وارد میکند.خسارات اقتصادی مایکوپلاسما ها چه به صورت اولیه در اثر مشکلات تنفسی و ابتلای مفاصل یا در اثر همزمانی آن با عفونت های پیچیده ویروسی و میکروبی تحت شرایط نامناسب بهداشتی و مدیریتی بروز می نماید.مایکوپلاسما گالی سپتیکوم یکی از اقتصادی ترین مایکوپلاسمای بیماریزا طیور است.در تجارت بین المللی توانایی تعیین وضعیت عفونت در محصولات صادراتی (تخم مرغ قابل جوجه کشی و جوجه یک روزه) اهمیت زیادی داشته و ضروری میباشد.عفونت با مایکوپلاسما گالی سپتیکوم تظاهرات بالینی متنوعی داشته که احتمالا بیماری مزمن تنفسی و افت کیفیت لاشه های گوشتی بالاترین رخداد را دارند که منتهی به ضبط لاشه در کشتارگاه میشود.معهذا مایکوپلاسما گالی سپتیکوم غالباً به عنوان یکی از عوامل ایجاد کننده بیماریهای کمپلکس شناخته میشود و رابطه میان این باکتری و ویروس های مختلف تنفسی (ویروس های نیوکاسل، برونشیت عفونی، آنفولانزای تیپ A و لارنگوتراکئیت)، اشریشیاکلی، هموفیلوس پاراگالینارم، گامبورو و سایر عوامل کاملاً مشخص شده است.واکسن های بیماری نیوکاسل و برونشیت عفونی ممکن است واکنش های چشمگیری در پرندگان آلوده به مایکوپلاسما گالی سپتیکوم ایجاد کنند.MS بیشتر به صورت عفونت تحت بالینی قسمت فوقانی دستگاه تنفس روی میدهد.MS هنگامی که همراه با بیماری نیوکاسل یا برونشیت عفونی یا هر دو است، باعث عفونت کیسه های هوایی میشود.در سایر موارد عفونت MS سیستمیک شده و به سینوویت عفونی منجر میشود که یک بیماری عفونی حاد تا مزمن در ماکیان و بوقلمون است.در این میان وجود تستهای برای شناسایی MG و MS ضرورت یافته است،هدف اصلی این مطالعه شناسایی همزمان MG و MS به روش DUPLEX PCR بوده است.در این مطالعه از 60 طیور (نواحی تهران) با استفاده از سواپ کتانی استریل از شکاف حلقی- کامی، نای و کیسه های هوایی نمونه برداری انجام شد که سواپ ها به همراه 1 میلی لیتر سرم فیزیولوژی جهت انجام تست های مولکولی به آزمایشگاه منتقل شد.جهت تشخیص جنس مایکوپلاسما از پرایمرهای اختصاصی استفاده شد و 40 نمونه به تایید جنس مایکوپلاسما رسید و سپس با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن16srRNA تست تشخیص گونه مایکوپلاسما سینوویه ومایکوپلاسما گالی سپتیکوم انجام گرفت.26 نمونه در واکنش گونه با تشکیل باندbp 272 در ژل آگارز از نظر MS تایید شدند و 6 گونه در واکنش گونه با تشکیل باند bp791 در ژل آگارز از نظر MG تایید شدند و 6 نمونه حاوی هر دو باکتری بودند.جهت شناسایی همزمان MG و MS واکنش Duplex PCR راه اندازی شد. کل 6 نمونه ای که در PCR منفرد از نظر MG مثبت بودند در واکنش Duplex PCR نیز مثبت شدند.در مورد MS از 26 نمونه PCR مثبت، 18 نمونه در Duplex PCR مثبت شدند.همچنین از 6 نمونه که حاوی MS و MG بودند، 5 نمونه در Duplex PCR هم مثبت بودند.با توجه به این که تکنیک فوق نیاز به زمان و هزینه کمتری نسبت به PCR دارد و نتایج بدست آمده نیز رضایت بخش میباشد، لذا میتوان به منظور شناسایی همزمان MS و MG روش Duplex PCR را به عنوان روش جایگزین PCR معرفی کرد.
- Abstract
- Avian mycoplasmosis is caused by some pathogenic Mycoplasma spp., of which Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) have long been recognized as common respiratory pathogens especially in chickens. MG infections are commonly known as "chronic respiratory disease" of chickens characterized by respiratory rales, coughing, nasal discharge, and conjunctivitis. Mycoplasma synoviae most frequently occurs as a subclinical upper respiratory infection but may result in airsacculitis and synovitis in chickens. MS and MG are causing economic losses to the poultry industry worldwide. MG and MS can infect the embryo and subsequently produce infected progeny. Lameness and respiratory disorders due to MS infection result in decreased growth rate, loss of egg production, and economic losses in intensive production. Attempts to differentiate between these two major avian mycoplasmas by using molecular methods such as PCR tests were mainly based on the 16s rRNA gene. Multiplex PCR is a variant of PCR enabling simultaneous amplification of many targets of interest in one reaction by using more than one pair of primers. We showed here that PCR amplification targeting species-specific structural genes provided an efficient tool for the simultaneous detection and differentiation of MG and MS. Primers used in duplex PCR were the same as used for differential diagnosis between MG and MS. We provided 60 samples including air sac choanal cleft and tracheal swabs from flocks and run genus-specific PCR to confirm the mycoplasma genus. Forty out of 60 samples were positive. Then, the positive samples were tested with species-specific single PCR using MS1 (for MS) and MG10 (for MG) primers. Out of 40 samples, 6 samples formed 791 bp and were positive for MG, 26 samples formed 272 bp band and were positive for MS, and 6 samples formed both 791 and 272 bands and were positive for both MG and MS. The duplex PCR for simultaneous detection of MG and MS was set up using MG10, MS1, and M3R primers. The results showed that all MG positive samples in single PCR were also positive for MG in duplex PCR; out of 26 MS positive samples in single PCR, only 18 were found to be positive for MS in duplex PCR; and out of 6 MG and MS positive samples in single PCR, 5 were positive for both MG and MS in duplex PCR. It was concluded that the duplex PCR was a more rapid and inexpensive method than the single PCR for the detection of MG and MS. Therefore, the multiplex PCR can be an alternative method for PCR to detect MG and MS infection simultaneously.
