عنوان پایان‌نامه
خالص
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3399;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 54127;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3399
- تاریخ دفاع
- ۲۷ شهریور ۱۳۹۱
- دانشجو
- صیاد غلامی
- استاد راهنما
- بهار نیری فسایی
- چکیده
- کلی باسیلوز طیور از مهمترین بیماریهای باکتریایی است که صنعت طیور در تمام دنیا درگیر آن می باشد. این بیماری به وسیله گروهی از باکتری های اشریشیا کلی بیماریزای طیور ایجاد می شود که بسته به حدت سویه ، وضعیت میزبان وحضور و نوع عوامل مستعد کننده می تواند منجر به مرگ یا ایجاد التهاب در ارگان های مختلف گردد. کلی باسیلوز طیور به دنبال عدم رعایت اصول بهداشتی و استانداردهای مدیریتی و برخورد جوجه با بیماریهای تنفسی اتفاق می افتد ولی روش مناسب وکاملی برای کنترل بیماریهای تنفسی وجود ندارد. کنترل کلی باسیلوز معمولا از طریق تجویز آنتی بیوتیک ها صورت می گیرد که علاوه بر تحمل هزینه های سنگین به تولید کنندگان باعث افزایش مقاومت میکروبی نیز می گردد. لذا پیشگیری از کلی باسیلوز با واکسیناسیون مورد توجه محققین بوده است که در این مورد در طیور واکسن های مختلفی تهیه و مورد بررسی و ارزیابی قرار گرفته اند. یکی از عوامل مهم حدت در اشریشیاکلی بیماریزای طیور که باعث ایجاد مقاومت به کمپلمان سرم می گردد, ژن افزایش بقا (iss) در سرم می باشد. پروتئین Iss که توسط ژن iss رمز می شود یکی از پروتئین های سطحی باکتری اشریشیاکلی می باشد و باعث ایجاد مقاومت در برابر کمپلمان می شود. APEC ها و گروههای سرمی متعدد آن واجد این ژن هستند. این پروتئین دارای خاصیت آنتی ژنی می باشد و توانایی ایجاد محافظت در برابر سویه های ناهمگون را دارد که روی پلاسمید ColV قرار دارد. هدف از این تحقیق خالص سازی و جداسازی ژن iss در اشریشیا کلی های جدا شده از طیور مبتلا به کلی باسیلوز می باشد. در ابتدای امر برای تشخیص وجود ژن issدر باکتری از یک جفت پرایمر اختصاصیF_ iss و iss_R مربوط به ژن iss استفاده گردید. و بعد پروتئین آن بیان شد و توسط SDS_PAGE آنالیز گردید . ودر مرحله بعد جهت خالص سازی و جداسازی پروتئین نوترکیب از ستون های گلوتاتیون سفاروز 4B و فاکتور Xa استفاده شد که در این مرحله نیز جهت تایید خالص سازی و جداسازی پروتئین iss از SDS_PAGE و وسترن بلات استفاده شد. به طور کلی می توان گفت که از ژن و پروتئین مربوط به آن می توان برای شناسایی و کنترل اشریشیاکلی بیماریزای طیور استفاده نمود .
- Abstract
- Avian Colibacillosis is one of the most important bacterial diseases which Poultry Industry is involved with it around the world. It is caused by a group of Avian pathogenic E. coli bacteria.As precise Pathogenicity mechanisms and Overall virulence factors of Colibacillosis is not clear, also there is not a single bacterial trait to use as a virulence sign or an object for controlling the disease, Colibacillosis has not been controlled by far. Increaed Serum Survival(Iss) protein in serum is one the most important intensity factors of E.coli which causes resistance to Serum Complement. Increaed Serum Survival protein which is coded by iss gene is one of Bacterial sur-face proteins of E.coli which causes resistance to serum Complement. Choromatogeraphy is an essential technique in every Protein Purification laborato-ries.In Chromatographic techniques, tendency with different Choice of vulnerabilities can provide a powerful complex for Purification of each biomolecule. Increaed Serum Survival Protein of Strain X1378 was identified in this study.This protein is connected to GST protein and Molecular weight of it is 34 kd (iss+GST) in this time.Glutathione sepharose column 4b were used for protein purificating. 34kd Protein was purified . Xa factor was used in order to isolate protein Iss and GST pro-tein.Therefore, Iss protein with 8kd molecular weight was purified.It was injected it to rabbit in order to investigate immunity of protein iss for 3 times with Intervals of 14 days .Blood samples of rabbits was collected one week after third inoeculation.The serum was separated. The immunization properties of Iss was confirmed by using western blot technique. According to the results of this study it seems that Iss has the ability of Immunization of poultry against invasive strain of Echerichia coli.
