عنوان پایان‌نامه
جداسازی سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی از بیضه گوساله
- رشته تحصیلی
- مامایی و بیماری های تولید مثل دام
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 495 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 495 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 55356
- تاریخ دفاع
- ۱۳ تیر ۱۳۹۱
- دانشجو
- شیوا شفیعی
- استاد راهنما
- پرویز تاجیک, حمید قاسم زاده نوا
- چکیده
- هدف ما در این مطالعه بررسی اثر دو فاکتور رشد GDNF و CSF1 روی میزان کلونی زایی سلولهای اسپرماتوگونی گاوی در همکشتی با سلول های سرتولی بود. این فاکتورها به عنوان دو عامل دخیل در جایگاههای سلولهای بنیادی اسپرماتوگونی (SSC niche)، جایگاه هایی که خودسازی این سلول ها به تمایز آنها غالبیت دارد، مطرح هستند. سلولهای اسپرماتوگونی از بیضه گوساله های 3-5 ماهه جدا شده و در حضور غلظت های متفاوت CSF1 و GDNF به مدت 2 هفته کشت داده شدند. ماهیت سلولهای سرتولی و اسپرماتوگونی حاضر در کشت توسط رنگ آمیزی ایمیونوفلورسانت بر ضد vimentin و OCT4 تأیید شد. به طور خلاصه، بر اساس نتایج بدست آمده در این مطالعه می توان بیان نمود که افزودن GDNF و CSF1 به تنهایی به محیط کشت سلول های اسپرماتوگونی گاوی احتمالاً اثرات مثبتی روی کلونی زایی این سلول ها خواهد داشت. به علاوه، استفاده توأم از این دو فاکتور رشد، باعث تقویت معنی دار کلونی زایی سلول های اسپرماتوگونی گاوی در محیط کشت خواهد شد (P<0.05). همچنین می توان پیشنهاد کرد که اثرات CSF1 بر خلاف GDNF با افزایش دوز تقویت نمی شود و دوز بالای CSF1 (100 ng/ml) در مقایسه با دوز پایین و متوسط (10 و 50 ng/ml) اثر کمتری در بهبود کلونی زایی سلولهای اسپرماتوگونی گاوی در محیط کشت دارد.
- Abstract
- Spermatogonial stem cells (SSCs) are infrequent self-renewing cells among type A spermatogonia within the seminiferous tubules and are the basis of spermatogenesis in mammalian testis. Adequate number of SSCs is a primary requirement for the study of their behavior, regulation and further biomanipulation. Here we studied the development of primary co-cultures of bovine type A spermatogonia and prepubertal Sertoli cells in the presence of Glial cell line-Derived Neurotrophic Factor (GDNF) and Colony Stimulating Factor 1 (CSF1), two potential contributors in SSC niche. The effect of different concentrations of CSF1 ( 0, 10, 50 and 100 ng/ml) with and without GDNF (50 ng/ml), on colonization activity of spermatogonial cells was assessed 4, 7 and 11 days after beginning of the culture by counting total number of colonies and measuring their area in each group of experiment. Immunofluorescent staining against OCT4 and vimentin performed to confirm the nature of the SSCs and sertoli cells respectively. Using separately, we observed that CSF1 and GDNF nonsignificantly (p>0.05) improved the colonization of bovine spermatogonial cells in comparison with control treatment but when these two growth factors were added to the culture simultaneously, this improvement was statistically significant (p<0.05). We also observed that increasing the concentration of CSF1 in culture does not improve its effects. In contrast, total number and total area of observed colonies were higher with 10 and 50 ng/ml CSF1 compared to 100ng/ml CSF1.
