عنوان پایان‌نامه
پروژه تحقیقاتی
- رشته تحصیلی
- بیماریهای طیور
- مقطع تحصیلی
- دکترای تخصصی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 679 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 679 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 81727;کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 679 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 679 ت;
- تاریخ دفاع
- ۱۰ مهر ۱۳۹۵
- دانشجو
- مهدی چراغچی باشی
- استاد راهنما
- سیدمصطفی پیغمبری
- چکیده
- زمینه مطالعه: بیماری بورس عفونی (Infectious bursal disease, IBD) بیماری با واگیری بسیار بالا در طیور است. برای صنعت طیور، تمایز بین جدایه های کلاسیک حاد و فوق حاد ویروس IBD اهمیت زیادی دارد تا برنامه مناسبی برای واکسیناسیون اتخاذ شود. تست های سرولوژی و مولکولی معمول بسیار پرزحمت، زمان بر و از نظر حساسیت متغیر می باشند. این در حالی است که آنالیز منحنی ذوب با دقت بالا روشی نسبتا سریع می باشد. هدف: این مطالعه برای تعیین میزان کارآئی روش منحنی ذوب با دقت بالا برای تفریق جدایه های مختلف بر روی تعدادی از جدایه های ایرانی ویروس IBD که قبلا ماهیت آنها با استفاده از روش آنالیز RT-PCR/RFLP (با استفاده از پرایمرهای پروتئین VP2) و آنالیز سکانس برای ما مکشوف بود، طراحی شد. روش کار: در این مطالعه از جدایه های ویروس IBD برای آزمون بررسی ذوب با دقت بالا در محدوده دمایی 81 تا 92 درجه سانتی گراد پس از انجام استخراج RNA و رونوشت برداری معکوس و Real Time RT- PCR استفاده شد. نتایج: یافته های این تحقیق نشان می دهد که در آزمون منحنی ذوب با دقت بالا میزان نقطه ذوب برای اولین منحنی از ویروس های مورد آزمایش به طور واضح متفاوت با سویه های واکسینال بود و موید حاد بودن سویه های مورد مطالعه می باشد که در همخوانی با نتایج توالی مولکولی بود. نتیجه گیری نهائی: از مطالعه کنونی می توان نتیجه گرفت که تکنیک بررسی منحنی Real-time RT-PCR HRM روشی مقرون به صرفه و قابل اعتماد در بین روش های مورد استفاده در حال حاضر است و به منظور شناسایی حدت جدایه های جدید ویروس بورس عفونی می تواند مورد استفاده قرار گیرد.
- Abstract
- BACKGROUND: Infectious bursal disease (IBD) is a highly contagious disease of young birds. Differentiation between classical virulent and very virulent IBDV (vvIBDV) isolate is very important for the poultry industry to choose the right vaccination program. Molecular and serological tests are time consuming and have variable sensitivity. However, the melting curve analysis is relatively fast method with high precision. OBJECTIVES: This study was designed to evaluate the efficacy of the melting curve analysis for differentiation of some Iranian IBDVs which their identity had been previously determined by RT-PCR/RFLP analysis. METHODS: In this study, after RNA extraction and reverse transcription and Real Time RT- PCR of IBDVs, high melting resolution at temperatures ranging from 81 to 92°C were performed. RESULTS: The findings of this study showed that in the high resolution melting curve analysis, melting point of the field isolates for the first curve was clearly different from that of vaccine strain confirming the very virulent pathotype of the isolates which was comparable with the results of nucleotide sequence. CONCLUSIONS: We concluded that the real-time RT-PCR HRM technique is cost-effective and reliable among the currently used methods and can be used for differentiation of IBDV isolates.
