عنوان پایان‌نامه
بررسی اثر ملیتین سم زنبور عسل ایرانی بر روی انفجار تنفسی نوتروفیل ها با استفاده از روش کمیلومینسانس
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3567;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3567;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 69618
- تاریخ دفاع
- ۲۰ اسفند ۱۳۹۳
- دانشجو
- فاطمه نوع پرست
- استاد راهنما
- صدیقه نبیان
- چکیده
- هدف: زنبورعسل حشره ای با ارزش و با فرآورده های بسیار مهمی است که آن ها در درمان بسیاری از بیماری ها کاربرد دارد. یکی از مهم ترین فرآورده ، زهر زنبورعسل است که امروزه کاربرد های درمانی آن در بخش های مختلفی مشخص شده است. هدف از این پژوهش بررسی اثرملیتین زهر زنبور عسل بر روی انفجار تنفسی نوتروفیل ها با استفاده از روش کمیلومینسانس بوده است. مواد و روش کار: در ابتدا اقدام به جمع آوری زنبور های عسل از چند زنبورستان نمودیم سپس به صورت مکانیکی، کیسه سم آنها خارج گردیده و پس از تخلیص زهر ، ساختار پروتئینی آن در زنبور عسل ایرانی با استفاده از روش SDS-PAGE مشخص گردید. سپس این الگو با الگوهای پروتئینی زهر زنبور عسل تهیه شده از یکی از کشور های اروپایی (فرانسه) و همچنین زهر زنبورهای وحشی ایران (وسپا و ژاکت زرد) و اروپا (پولیستس و ژاکت زرد) مورد مقایسه قرار گرفت. لازم به ذکر است که زهر زنبورهای عسل و وحشی اروپایی و ملیتین به عنوان کنترل مثبت به صورت تجاری تهیه گردید. در ادامه با روش کمی لومینسانس، اثر ملیتین در انفجار تنفسی نوتروفیل های خون انسان و حیوانات مختلف مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: پس از انجام الکتروفورز مربوط به نمونه های زهر زنبورعسل ایرانی و اروپایی و زهر زنبوروحشی ایرانی و اروپایی تعدادی باند پروتئینی در محدوده 8/2 تا 180 کیلو دالتون به دست آمد. در رابطه با مقایسه زهر زنبور عسل ایرانی و اروپایی، باند هایی با وزن مولکولی 5/9، 11، 18، 40 کیلودالتون به ترتیب مربوط به مهارکننده پروتئاز، آدولاپین ، فسفولیپاز A 2، هیالورونیداز به دست آمد. هم چنین 3 باند مشترک با وزن مولکولی 55 ، 92 و 170 کیلودالتون مربوط به ایکارپین، اسید فسفومونواستراز و آلفا گلوکوزیداز نیز مشاهده گردید. در مقایسه زهر زنبور وحشی اروپایی و ایرانی، به ترتیب 2 باند مشترک 34 و 23 کیلو دالتون تنها در زنبور های وحشی مشاهده شد که احتمالا مربوط به فسفولیپاز 1 A و آنتی ژن 5 می باشد. باند مربوط به ملیتین با وزن مولکولی حدود 8/2 کیلو دالتون در زهر تمام زنبورها مشاهده شد. در آزمایش کمی لومینسانس، ملیتین سبب کاهش روند انفجار تنفسی نوتروفیل در خون حیوانات مختلف گردید که این اثر وابسته به دوز بوده است. بحث و نتیجه گیری: ملیتین یکی از مهم ترین پپتید های زهر زنبور عسل است. این پپتید دارای اثر ضد التهابی و همولیز کنندگی در دوز های بالا می باشد. در پژوهش حاضر نشان داده شد که ملیتین در دوزهای بالا قادر به کاهش مراحل انفجار تنفسی نوتروفیل ها می باشد که این واکنش در روند ایجاد بیماری التهابی و خود ایمنی از جمله آرتریت روماتوئید حائز اهمیت می باشد. مطالعات ما نشان می دهد که احتمالا ملیتین می تواند در آینده جایگزین مناسبی برای داروی ساختگی و شیمیایی در درمان آرتریت روماتوئید باشد.
- Abstract
- Objects: Honey bee is a very useful insect which its products are suitable for treatment of many humans’ diseases including arthritis, rheumatoid arthritis. The aim of this study was identification of the efficacy of melittin of honey bee venom in respiratory burst of dog neutrophils using chemiluminescence. Materials and methods: firstly Iranian honey bees collected from some apiaries and their venom sac exctracted manually and European bees (honey bees and wild bees) venoms and also pure melittin as positive control were commercially prepared. Electrophoresis technique was carried out. The pattern of Iranian honey bees (Apis mellifera) and European honey bees (Apis mellifera) were compared with the pattern of Iranian wild bees (Vespa and Yellow Jacket) and European wild bees (Polistes and Yellow Jacket). After that, we studied on respiratory burst of dog neutrophils by adding different doses of melittin by chemiluminescence and the results compared with results obtained from human and some other animals neutrophils respiratory burst. Result: Electrophoresis of different venoms of Iranian and European honey bees (Apis mellifera) and Iranian wild bees (Vespa and Yellow Jacket) and European wild bees (Polistes and Yellow Jacket) showed some protein bands with molecular weights ranging from 2.8 to 180 kDa. In comparison of two venom related to Iranian and European honey bee venoms (Apis mellifera),some common bands were obtained such as 9.5,11,18,40 kDa molecular weight which were related to protease inhibitor, adolpin, phospholipase A2, Hyaluronidase and also three another bands with molecular weights of 55, 92, 170 kDa were related to Icarapin, phosphomonestrease acid, ?-glucosidase. In comparison of two European and Iranian wild bees’ two bands with molecular weight of 34 and 23 kDa were observed only in wild bees which were related to phospholipase A1 and Antigen 5 respectively. Melittin with molecular weight of 2.8 kDa was detected in venom of all bees (Honey bee and wild bees). The result of chemiluminescence assay showed that melittin decrease the process of neutrophils respiratory burst in different groups of animals which were dependent dose. Conclusion: Melittin is a very important peptide of honey bee venom and has anti-inflammatory and hemolytic effect in high doses. Our study showed that melittin in high doses can decrease the process of respiratory burst of neutrophils. Respiratory burst is important process in autoimmune disease like rheumatoid arthritis. Our study showed that melittin of bee venom could be use in treatment of in rheumatoid arthritis instead of synthetic and chemical drugs.
