عنوان پایان‌نامه
بررسی بیان ژن فاکتور KITLG, FGF۲ GDNF سلول های بیضه گوساله کشت داده شده در محیط محتوی ماتریکس خارج سلولی در مقایسه با محیط معمولی
- رشته تحصیلی
- مامائی و بیماریهای تولید مثل دام
- مقطع تحصیلی
- دکترای تخصصی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 603 ت;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 603 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 69567
- تاریخ دفاع
- ۱۹ خرداد ۱۳۹۴
- دانشجو
- وحید اکبری نژاد
- استاد راهنما
- پرویز تاجیک
- چکیده
- ماتریکس خارج سلولی بر عملکرد سلول ها مؤثر بوده و شرایط را جهت تمایز سلول های اسپرماتوگونی فراهم می آورد. به علاوه اعتقاد بر این است که رابطه بین سلول های سوماتیک پیرامونی (سلول های نیچ) و سلول های بنیادی اسپرماتوگونی به صورت یک تعامل دو طرفه می باشد. هدف از انجام مطالعه حاضر در وهله اول ارزیابی به کارگیری ماتریکس خارج سلولی در کشت آزمایشگاهی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی و اثر آن بر سرنوشت این سلول ها و همچنین فاکتورهای رشد اصلی نیچ بود. هدف دیگر مطالعه حاضر ارزیابی تأثیر سلول های بنیادی اسپرماتوگونی بر بیان ژن فاکتورهای رشد اصلی نیچ بود. متعاقب جداسازی، سلول های بافت بیضه گوساله در گوده های بدون پوشش، گوده های پوشش داده شده با ماتریکس خارج سلولی به مدت 12 روز کشت داده شدند. در یکی از گروه های آزمایشی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی متعاقب کشت گوده های پوشش داده شده با ماتریکس خارج سلولی از محیط کشت حذف شدند. در این مطالعه کلونی زایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی با استفاده از میکروسکوپ معکوس، بیان ژن مارکرهای اسپرماتوگونی های تمایزنیافته و تمایزیافته به انضمام فاکتورهای رشد دخیل در رشد و تمایز اسپرماتوگونی ها با استفاده از تکنیک PCR زمان واقعی کمی و تستوسترون با روش کمیلومینسانس مورد ارزیابی قرار گرفتند. در کل، مطالعه حاضر نشان داد که کشت بر روی ماتریکس خارج سلولی در مقایسه با کشت بر روی پلاستیک سبب تسهیل تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونی می گردد که این اثر احتمالاً از طریق افزایش بیان ژن KITLG صورت می پذیرد. به علاوه مطالعه حاضر نشان داد که GDNF نقش کلیدی در تکثیر و خودزایی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی طی دوره کشت معمولی بازی می کند. از طرف دیگر مطالعه حاضر مبین این مطلب است که حذف سلول های بنیادی اسپرماتوگونی به افزایش بیان GDNF و FGF2 و کاهش بیان KITLG و تولید تستوسترون منتهی می گردد. این یافته بیانگر این نکته است که از بین رفتن یا کاهش جمعیت سلول-های بنیادی اسپرماتوگونی سبب تغییر رفتار سلول های سوماتیک تشکیل دهنده نیچ به شکلی می گردد که به تحریک خودزایی و مهار تمایز سلول های بنیادی اسپرماتوگونی منجر گردد.
- Abstract
- It has been shown that extracellular matrix (ECM) could affect the function of cells, thereby facilitating the differentiation of spermatogonial stem cells (SSCs). Additionally, it is believed the relationship between niche cells and SSCs is a reciprocal interaction. Therefore, the present study was conducted to evaluate the addition of ECM to cell culture on SSCs fate and the growth factors regulating their function as well as to assess the impact of SSCs removal from the cell culture on niche growth factors. The colonization of SSCs was assessed by inverted microscope, the gene expression was evaluated using quantitative real-time PCR and testosterone concentration was measured using chemiluminescence method. Collectively, the present study showed that culture on ECM in comparison to culture on plastic facilitated the differentiation of SSCs, which was probably mediated through elevation of KITLG expression. In addition, it was revealed that GDNF plays pivotal role in proliferation and selfrenewal of SSCs during conventional culture. Furthermore, the results showed that SSCs removal from culture would lead to elevation of GDNF and FGF2 expression, reduction in KITLG expression and testosterone production. This finding implies that abolishment or reduction in the SSCs population could alter the behavior of niche cells in order to stimulate selfrenewal and inhibit differentiation in SSCs.
