عنوان پایان‌نامه
بررسی مولکولی ارجاع شده تحت تیپ های H۷,H۵,H۹ ویروسهای انفلوانزای طیور در سواب های نای و یا مدفوع مرغان بومی ارجاعی به کلینیک پرندگان زینتی دانشکده دامپزشکی در سالهای ۹۳-۹۰
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3584;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71788;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3584;کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3584;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 71788;کتابخانه دا
- تاریخ دفاع
- ۳۱ شهریور ۱۳۹۴
- دانشجو
- علیرضا آشوری
- استاد راهنما
- مهدی وصفی مرندی
- چکیده
- زمینه مطالعه: آنفلوانزای طیور یکی از بیماری های بسیار مسری است که با آسیب های اقتصادی و تهدید سلامتی در حیوانات و انسان مرتبط می باشد. ویروس های آنفلوانزای طیور در ماکیان، علائم بیماری متنوع از عفونت تحت بالینی تا بیماری بسیار حاد با تلفات 100 درصد ایجاد می کنند. تکنیک های جدید تشخیص آزمایشگاهی برای شناسایی سریع و مطمئن ویروس های آنفلوانزا طراحی و توسعه یافته است. حساسیت، ویژگی، سرعت و ضریب اطمینان بیشتر روش های مولکولی برای تشخیص ویروس های آنفلوانزای طیور در مقایسه با سایر روش ها، منجر به توسعه سریع و وسیع کاربرد روش های مولکولی در آزمایشگاه های تشخیص بیماری های طیور در سطح بین المللی و کشور ما شده است. مواد و روش کار: برای این منظور، نمونه های مشکوک به بیماری نیوکاسل طیور جمع آوری شده در آزمایشگاه ویروس شناسی طیور گروه بیماری های طیور یا نمونه های ارسالی از سازمان دامپزشکی کشور، پس از آماده سازی به تخم مرغ های جنبن دار نه روزه تلقیح شدند. مایع آلانتوئیک برداشت شده و ا از نظر حضور ویروس با استفاده از آزمایش هماگلوتیناسیون و ممانعت از هماگلوتیناسیون نیوکاسل و آنفلوانزا (H9N2) آزموده شد. برای استخراج RNA ویروسی، از نمونه های مایع آلانتوئیک یا سواپ, از محلول استخراج RNA به نام RNX™-Plus (شرکت سیناژن) مطابق دستورالعمل شرکت سازنده، استفاده شد. نسخه برداری معکوس با استفاده از کیت RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (شرکت فرمنتاس)، طبق برنامه ی مشخص شده انجام پذیرفت. سپس واکنش زنجیره پلیمراز چندتائی به همراه پرایمر های اختصاصی، جهت تشخیص تحت تیپ های H5، H7 و H9 در نمونه های جمع آوری شده، مورد استفاده قرار گرفت. نتایج: نتایج حاصل از این مطالعه نشان داد که حدود 5/12 درصد (8 نمونه) از نمونه های جمع آوری شده از نظر حضور ویروس های آنفلوانزا مثبت بودند. ،در میان نمونه های مثبت, 8 درصد (5 نمونه) H9، 5/1 درصد (1 نمونه) H5 و 3 درصد (2 نمونه) به طور همزمان آلوده به H5 و H9 بودند. کلیه نمونه های مثبت از نظر تحت تیپ H5، از نمونه های مشکوک به نیوکاسل ارجاعی توسط سازمان دامپزشکی کشور ردیابی شدند. بحث و نتیجه گیری: مطالعه ی حاضر بررسی همزمان تحت تیپ های مهم آنفلوانزا در نمونه های جمع آوری شده از مرغان بومی می باشد که در مجموع نشان می دهد احتمال حضور تحت تیپ H5 در مرغان بومی استان های شمالی وجود دارد. لذا به دلیل احتمال انتقال این ویروس به انسان در زمان معاینه , نهایت دقت و رعایت مسائل بهداشتی می بایست صورت پذیرد.
- Abstract
- Field of study : Avian Influenza is one of the highly contagious diseases that is realated to the economic loss and health threat of animals and human. Avian flu virus in poultry caused vast divergence of symptoms from subclinical infection to acute illness with 100% mortality. New laboratory diagnostic techniques were designed and developed for rapid and reliable identification of influenza viruses. More sensitivity, specificity, speed and reliability factor of molecular techniques for avian influenza virus diagnosis in comparison with other techniques resulted in the fast and wide expansion of molecular techniques usage in diagnostic laboratories of poultry diseases in International levels and our country. Materials and Methods: For this purpose, avian Newcastle doubtful samples which were gathered in avian virology laboratory in avian disease department or sending samples from Iran Veterinary Organization after preparation of collected samples, they were injected into 9th days old embryonic eggs. The allantoic fluid was gathered and examined through hemagglutination test and hemagglutination inhibition test for detection of virus presence. For extraction of viral RNA from allantoic fluid samples, RNA extraction solution called RNX ™ -Plus (Cinnagen company) according to the manufacturer's instructions was used. Reverse transcription with Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit (Fermntas company) was carried out in accordance with specified program. The Multiplex polymerase reaction with dedicated primers for detecting the H5, H7 and H9 subtypes in collected samples were used. Results: The results of this study showed that approximately 12/5 % (8 samples) of the collected samples were positive in aspect of the presence of influenza virus . Among positive samples, 8% (5 samples) were H9, 1.5 % (1 sample) were H5 and 3% (2 samples) infected with H5 and H9 simultaneously. All H5 positive samples among Newcastle doubtful samples were traced back to which was sent from Iran Veterinary Organization. Conclusion: This Study is simultaneous investigation of the important subtypes of influenza in collected samples of native (indigene) birds,that altogether shows there is a probability of the H5 subtype presence in native birds. So because of the possibility of transmission to human during examination time, accuracy and human health ovservation should be done,.
