عنوان پایان‌نامه
بررسی یک روش
- رشته تحصیلی
- دامپزشکی
- مقطع تحصیلی
- دکتری عمومی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 3353;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 51718;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 3353
- تاریخ دفاع
- ۲۹ بهمن ۱۳۹۰
- دانشجو
- صدیقه میرلطیفی
- استاد راهنما
- فرامرز قراگوزلو
- چکیده
- در توسعه صنعت دامپروری گله های گاو شیری و گوشتی کنترل جنس موالید و بحث نسبت جنسی از اهمیت ویژه برخوردار است. در این راستا امروزه یکی از بهترین راه ها برای پیش انتخاب جنسی نوزادان استفاده از منی تعیین جنس شده با روش فلوسیتومتری می باشد. گسترش استفاده از منی تعیین جنسیت شده نیز، بستگی به در دسترس بودن، قیمت کم، توانایی باروری بالا و به ویژه درجه خلوص آن پس از عملیات جداسازی دارد(31). در این راستا مطالعه حاضر به بررسی روشی با استفاده از تکنیک روشReal time PCR برای ارزیابی نسبت جنسی در اسپرم تعیین جنسیت نشده در گاو نر می پردازد. در این آزمایش برای ارزیابی نسبت اسپرم های حاوی کروموزوم Y وX از روش Real Time PCR با ماده شناساگر SYBR Green و روش ارزیابی مطلق استفاده شد. بدین منظور 3 آغازگر با عنوان SRY، AMELX و AMELXY به ترتیب اختصاصی ژنهای SRY (توالی ویژه کروموزوم Y) ،آملوژنین (توالی ویژه کروموزوم X) طراحی گردید. آغازگر سوم که بعنوان کنترل داخلی استفاده شد یک توالی در هر دو کروموزوم های جنسی X وY مربوط به ژن آملوژنین در گاو هلشتاین را تکثیر می‌کرد. در این روش برای بدست آوردن منحنی استاندارد مطلق از محصول PCR حاوی قطعه هدف اختصاصی هر آغازگر به عنوان نمونه استاندارد استفاده شد. پس از انجام واکنش Real time PCR نتایح بدست آمده از طریق روش ارزیابی مطلق آنالیز و مقادیر و نسبت های محاسبه شده برای کروموزم X وY بررسی شد. نتایج بدست آمده از مطالعه حاضرنشان داد که استفاده از محصول PCR به عنوان نمونه استاندارد به تنهایی با آغازگرهای طراحی شده فوق مناسب نیست و نتایج تکرار شونده و قابل اطمینانی را حاصل نمی کند.
- Abstract
- Sex preselection and control of sex ratio in bovine offspring is really important in dairy and beef cattle livestock industry development. In this regard, one of the routine ways to preselect the offspring is using sexed semen by flow cytometry method. Expansion of the use of sexed semen depending on availability, low cost, high reproductive efficiency and purity after separation operation. Therefore, this study examined a method using Real Time PCR Technique for evaluation of the sex ratio in none- sexed bovine frozen semen. In this experiment the proportion of X and Y chromosome bearing spermatozoa in bovine semen samples, was determined by Real Time PCR method using SYBR Green dye and absolute quantitation. To this purpose, three sets of primers as SRY, AMELX and AMELXY was designed specific for SRY (Y-chromosome specific sequence) and amelogenin (X-chromosome specific sequence and common sequence of X and Y chromosome) genes. Third primer was used as an internal control that amplify a common sequence on both X and Y chromosomes on amelogenin gene. To allow a absolute quantitation and obtaining the absolute standard curve, PCR product containing specific gene targets for each primer was used. The quantity of X and Y chromosomes in sperm samples and percentage of X and Y chromosome bearing spermatozoa was determined by Real Time PCR and then results was evaluated. Results of this study showed that use of PCR product as standard sample specially with this primer set is not reliable and effective and can not be recommended for quantifying the variation in proportion of X and Y chromosome bearing spermatozoa in bull semen.
