عنوان پایان‌نامه
تاثیر پروبیوتیکهابرروی بیان ژنی
- رشته تحصیلی
- بهداشت و کنترل موادغذایی
- مقطع تحصیلی
- دکتری تخصصی PhD
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 453 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 50782;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 453 ت
- تاریخ دفاع
- ۲۱ شهریور ۱۳۹۰
- دانشجو
- مهنوش پارسایی مهر
- استاد راهنما
- علی میثاقی, افشین آخوندزاده بستی
- چکیده
- پروبیوتیک ها باکتری های مفیدی هستند که پس از ورود به بدن در ناحیه روده ساکن شده و اثرات مفیدی در سلامتی انسان بر جای می گذارند. بررسی اثر ضد میکروبی پروبیوتیک ها در زمینه مواد غذایی بر روی باکتری های بیماری زای مهم از جمله استافیلوکوکوس ارئوس که از عوامل مسمومیت های غذایی رایج هستند لازم و ضروری به نظر می رسد.. انتروتوکسین های استافیلوکوکوس ارئوس ، اگزوپروتئین های مقاوم به حرارت هستند که سندرم گاستروانتریت درانسان ایجاد می کنند. بیشترین توکسین درگیر درمسمومیت های غذایی استافیلوکوکی،انتروتوکسینA میباشد در این تحقیق اثر سویه های پروبیوتیک لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس ، لاکتوباسیلوس پاراکازئی و لاکتوباسیلوس فرمنتوم جدا شده از ماست بر رشد و تولید انتروتوکسین باکتری استافیلوکوکوس ارئوس (ATCC 29213) و سپس بر بربیان ژنی انتروتوکسین A استافیلوکوکوس اورئوس در محیط آزمایشگاهی مورد بررسی قرار گرفت. دز تلقیح پروبیوتیک ها cfu/ml 107 * 1 و دز تلقیح استافیلوکوکوس اورئوسcfu/ml 105 * 1 بود و پس از تلقیح در محیط TSB و گرم خانه گذاری در دو دمای 25 و 35 درجه سانتی گراد، در زمان های صفر، 24، 48 و 72 ساعت، از کشت مخلوط موجود در محیط TSB در محیط های اختصاصی Baird Parker Agar و MRS کشت سطحی داده شد. استافیلوکوکوس اورئوس بدون حضور پروبیوتیک ها به عنوان کنترل گرم خانه گذاری شد و سپس به بررسی تولید انتروتوکسین در کشت مخلوط، با استفاده از کیت الایزای ریدا اسکرین پرداخته شد. در مرحله بعد، به بررسی بیان ژن انتروتوکسین A باکتری استافیلوکوکوس اورئوس در کشت های مخلوط و کنترل 18 ساعته به روش RT Real time PCR پرداختیم.از 16s rRNA به عنوان کنترل اندوژن استفاده گردید. پروبیوتیک هادر این مطالعه، رشد استافیلوکوکوس اورئوس (ATCC 29213) رانسبت به نمونه کنترل 3 لوگ در دمای 25 درجه سانتی گراد و 2 لوگ در دمای 35 درجه سانتی گراد کاهش دادند که این نتایج از نظر آماری معنی دار است (P<0.05) . سویه های پروبیوتیکی تولید انتروتوکسین های A، C و E را در دمای 25 درجه سانتی گراد مهار کرده اند و همچنین در دمای 35 درجه سانتی گراد انتروتوکسین های نوع A و E مهار شدند. مقایسه بیان ژن sea بین کشت های تیمار و کنترل در دو دمای 25 و 35 درجه انجام شده است که در دمای 25 درجه سویه های لاکتوباسیلوس فرمنتوم، لاکتوباسیلوس پاراکازئی و لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس نسبت به کنترل کاهش معناداری به ترتیب به میزان 8.8، 4.9، 7.1 برابر در بیان ژن نشان دادند(p?0.05). کاهش معنا دار در بیان ژن در دمای 35 درجه در مورد سویه های لاکتوباسیلوس فرمنتوم، لاکتوباسیلوس پاراکازئی و لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس نیز مشاهده گردید. کاهش معنادار به ترتیب به میزان 3.3، 5.2 و9.9 برابر همراه بوده است (p?0.05). بدین ترتیب استفاده از پروبیوتیک ها احتمالا راهکار جدیدی برای کنترل زیستی باکتری استافیلوکوکوس ارئوس بدون استفاده ازآنتی بیوتیک ها می باشد که علاوه بر حفظ توازن اکوسیستم های باکتریایی ممکن است به طورقابل توجهی درارائه اصولی برای ارتقا روش های مواجهه جدید کنترل گسترش سویه های مقاوم به آنتی بیوتیک استافیلوکوکوس اورئوس که نگرانی اصلی بهداشت عموم نیز می باشد موثر واقع شود.
- Abstract
- Probiotics are useful bacteria which, after consumption, inhibit the harmful microorganisms in the intestines and leave useful effects on human health. Study of their antimicrobial effect on pathogenic bacteria especially on Staphylococcus aureus in the field of food microbiology seems essential. Heat stable Entrotoxins of Staphylococcus aureus cause gastroenteritis syndrome. The most involved enterotoxin in Staphylococcal intoxication is enterotoxinA. In this study, the inhibitory effect of L. acidophilus, L. fermentum and L. paracasei isolated from yougurt on growth and enterotoxin production of Staphylococcus aureus ATCC 29213 was assessed in TSB medium, then their effect on the gene expression of sea was evaluated. To prepare the co-culture we added 1*108 cfu/ml of probiotic strains and of 105 cfu/ml S. aureus into TSB broth incunated the cultures at 25?C and 35?C. The effect of probiotic strains on growth of Staphylococcus aureus was evaluated after 0, 24, 48, 72 hours incubation of co-cultures. Enumeration of bacterial population was carried out on Baird Parker Agar and MRS Agar for Staphylococcus aureus and probiotic strains, respectively. Then we evaluated turbid samples for presence of enterotoxins using RIDA Screen kit. in the next step, we evaluated the gene expression of enterotoxin A in overnight co-culture and control by RT Real Time PCR. We used 16srRNA as internal control. All the stages were repeated 3 times. We found that probiotic strains could inhibit the growth of S. aureus when compared with control samples. It reduced the growth of S.aureus in 25?C by 3 logs at 24 and 48 hours after the incubation and by 2 logs at 72 hours, while at 35?C there were 2 logs reduction at all the hours. It also inhibited the production of entrotoxins of Staphylococcus aureus in both temperatures of 25?C and 35?C which was detected by means of ELISA RIDA Screen kit. Probiotics inhibited entrotoxins A, C and E at 25?C. They also inhibited the production of entrotoxin A and E at 35?C. Comparing gene expression of sea was done between co-culture and control in 25 c and 35C. L. fermentoum, L.paracasei and L. acidophilus strains showed a significant down regulation in 25C, 8.84.9and 7.1 time comparing control respectively (p?0.05). A significant down regulation in 35C was showed by L.fermentum, L.paracasei and L. acidophilus,3.3, 5.2 and 9.9 time, respectively. Therefore, probiotics may be used as new approach for biocontrol of S. aureus .Besides, keeping bacterial ecosystem balance it may provide increasing our knowledge of the mechanisms involved in LAB- S.aureus to open new avenues for the biocontrol of S. aureus with non-antibiotic means in a global contex where the emergence and spread of antibiotic resistanct starins becomes a major concern for public health.
