عنوان پایان‌نامه
مطالعه تشریحی و بافتی بیضه
- رشته تحصیلی
- علوم تشریحی
- مقطع تحصیلی
- دکترای تخصصی
- محل دفاع
- کتابخانه دانشکده دامپزشکی شماره ثبت: 451 ت;کتابخانه مرکزی -تالار اطلاع رسانی شماره ثبت: 49532;کتابخانه دانشکده دامپزشکی - مخزن مرد آباد شماره ثبت: 451 ت
- تاریخ دفاع
- ۲۹ تیر ۱۳۹۰
- دانشجو
- نادر گودرزی
- استاد راهنما
- زهرا طوطیان
- چکیده
- با توجه به کاربرد وسیع فنل و اثرات مخرب آن، مطالعه آناتومیکی و هیستولوژیکی(در سطح میکروسکوپ نوری و الکترونی) بیضه و ارزیابی توانائی باروری آن در موش سوری تیمارشده با فنل ضروری است. در این تحقیق 44 سر موش سوری نر بالغ و 64 سر موش سوری ماده بالغ 30-25 گرمی از نژاد NIH، تهیه شدند. موش های نر پس از توزین و ثبت وزن اولیه آنها، به طور تصادفی به سه گروه تجربی ویک گروه کنترل 11 تایی تقسیم شدند. گروه های تجربی روزانه به مدت 35 روز دوز های 30 ، 75 و 100 میلی گرم به ازای هرکیلوگرم وزن بدن از محلول فنل خالص و گروه کنترل تنها سرم فیزیولوژی هم حجم گروه های تیمار بصورت خوراکی و بطریقه گاواژ دریافت نمودند. پس از پایان 35 روز تیمار، از هر گروه آزمایشی 6 سر موش نر بطور تصادفی انتخاب شده و پس از توزین ، وزن ثانویه آنها ثبت گردید.سپس بوسیله کلروفرم بیهوش شده و پس از تشریح حیوان، بیضه ها و کانال دفران را در داخل بدن مشخص نموده و از نظرشاخص های مورفومتریک از جمله طول، عرض، ضخامت ونسبت وزن بیضه ها به وزن بدن، همچنین پارامترهای اسپرم مانند تحرک، قدرت زنده ماندن و تولید روزانه اسپرم مورد مطالعه قرار گرفتند. به منظور بررسی میزان باروری موش های نر، 7 سر موش نر باقیمانده از هر گروه، بطور جداگانه هر موش نر با دو موش سوری ماده بالغ به منظور جفت گیری نگهداری شدند. در مطالعه بافت شناسی بیضه در سطح میکروسکوپ نوری، پس از خارج نمودن بیضه راست از بدن، در محلول فرمالین 10% قرار داده و به آزمایشگاه بافت شناسی منتقل شد. پس از انجام مراحل آمادش بافتی، برش ها به روش هماتوکسیلین _ ائوزین رنگ آمیزی و مورد مطالعه قرار گرفته و تمام تغییرات بافتی ایجاد شده در بیضه گروه های تیمار نسبت به گروه کنترل مقایسه گردید. در بررسی هیستومورفومتریک بیضه ها، از هر بیضه 3 مقطع و از هر مقطع سه میدان دید انتخاب و به کمک فتومیکروسکوپ عکسبرداری شد. سپس از هر میدان دید سه لوله منی ساز در مقطع عرضی انتخاب شده و با استفاده از نرم افزار Axiovision 4.8 قطر و ضخامت اپیتلیوم ژرمینال لوله ها، اندازه گیری و ثبت گردید. به منظور بررسی تغییرات فراساختاری بیضه در گروهای تیمار و گروه کنترل، پس از خارج نمودن بیضه راست، نمونه ها در داخل محلول ثبوت اولیه قرار داده شدند. جهت تجزیه و تجلیل آماری، از نرم افزار آماری SPSS Version 12 و آزمون ,واریانس یکطرفه (ANOVA) و تست تکمیلی توکی (Tukey HSD test) استفاده و سطح معنی داری آنها در حد P? 0/05 در نظر گرفته شد. نتایج نشان داد که وزن بدن در گروه هایی که فنل را با دوز های 75 و 100 میلی گرم بر کیلوگرم دریافت نمودند در مقایسه با گروه کنترل کاهش معنی داری داشت ( P? 0.05) درحالیکه وزن، طول ، عرض و ضخامت بیضه ها در گرو های تجربی نسبت به گروه کنترل اختلاف معنی داری را نشان نداد. در بررسی وزن سپیدپرده، تنها در گروهی که فنل را به میزان mg/kg 75 دریافت کرده بودند، نسبت به گروه کنترل کاهش معنی داری دیده ش .( P? 0.05)در اندازه گیری قطر لوله های منی ساز و ارتفاع اپیتلیوم ژرمینال، اختلاف معنی داری بین گروه های کنترل و گروهی که فنل را به میزان mg/kg30و75 دریافت کرده بودند، دیده شد ( P? 0.05). نتایج حاصل از بررسی تولید روزانه اسپرم، تحرک اسپرم و درصدباروری، نشان می دهد که DSP در گروهی که فنل را به میزان 75 و 100 میلی گرم به ازای هرکیلوگرم وزن بدن و قدرت زنده ماندن اسپرم در همه گروه های تیمار نسبت به گروه کنترل کاهش معنی دار داشته است ( P? 0.05). در مطالعه مقاطع بافتی بیضه، در گروه های تیمار، افزایش مشخص در ضخامت غشاء پایه اپیتلیوم ژرمینال لوله های منی ساز، افزایش فاصله بین لوله های منی ساز و دژنراسیون بافت بینابینی، دژنراسیون لوله های منی ساز، تغییر شکل هسته برخی از سلول های رده اسپرماتوژنز، بهم ریختگی نظم سلولی و از هم گسستگی دراپیتلیوم ژرمینال لوله های منی ساز و کاهش سلول های رده اسپرماتوژنز، افزایش واکوئوله شدن در سیتوپلاسم سلول های لیدیگ و کاهش اسیدوفیلی سیتوپلاسم آنها مشاهده گردید. در سطح میکروسکوپ الکترونیک، بررسی تیغه پایه لوله های اسپرم ساز، کاهش ضخامت لامینا دنسا و افزایش ضخامت لامینا لوسیدا در گروه های تیمار که فنل را به میزان 30 و75 میلی گرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن دریافت نموده بودند نسبت به گروه کنترل مشاهده گردید. ولی در گروهی که فنل را به میزان mg/kg 100 دریافت نمودند کاهش محسوسی نسبت به گروه کنترل مشاهده نگردید. در مقایسه مقطع عرضی تاژک اسپرماتوزوئید و مشاهده آکسونم تشکیل دهنده آن در گروه های تیمار نسبت به گروه کنترل، کاهش تراکم الیاف های غلاف فیبروزی اطراف اکسونم مشاهده شد. طبق نتایج بدست آمده، فنل می تواند از طریق تاثیر بر قدرت تحرک اسپرم و غشاء پوشاننده آکسونم آن و کاهش تعداد اسپرم ها، به دلیل تاثیر احتمالی بر تقسیم سلول های رده اسپرماتوژنیک و در نتیجه کاهش ارتفاع اپیتلیوم ژرمینال و همچنین تاثیر بر ضخامت غشاء پایه و در نتیجه کاهش احتمالی دریافت مواد غذایی از طریق آن ونیز تاثیر بر تعداد اسپرم های سالم، در صد باروری را کاهش دهد.
- Abstract
- Regarding to largely usage of phenol and its harmful effects, anatomical and histological study of testis (at light and electron microscopy levels) and evaluation of fertility potential in Surri mice treated with phenol is necessary. In this research, 44 mature male mice and 64 mature female with average weight of 25-30 grams from NIH breed were provided. The male mice after weightening and recording their primary weights, were divided randomly into three experimental groups and one control group including 11 mice. The experimental groups received pure phenol at 30, 75 and 100 mg/kg dosage, and the control group received only physiologic serum with the same volume as the treatment groups through gavage during 35 days. After this period, 6 male mice were selected randomly from each experimental group and after weightening, their secondary weights were recorded. The mice were anesthetized by chloroform and after dissection the testes and ductus deference were studied for morphometric indexes including length, width, thickness and the ratio of the weight of testes to body weight, and also sperm parameters such as motility, viability and daily sperm production. In order to investigating the rate of fertility of male mice, the remaining 7 male mice from each group, every male mouse was maintained with two female mice separately for copulating. In histological study of testis with light microscope, after removing the right testis and fixation in 10% formalin with after hi histological processing, the sections were stained with hematoxylin and eosine and studied.and the histological changes in testes of the experimental groups compared with the control group were examined. For histomorphometric assessment, three sections from each testis and three objective field from each section were selected and recorded by a photomicroscope. Then from each objective field three seminiferous tubules were selected and using Axiovision 4.8 software, the diameterand thickness of germinal epithelium of tubules were measured and recorded. In order to examining ultrastructural changes of testes in experimental and control groups after removing the right testis, the specimens were put in the primary fixative solution. For statistical analysis, the SPSS Version 12. software and ANOVA and also complementary test of Tukey ( Tukey HSD test) were used and their significance level was considered at P<_0/05. The results showed that the body weight in the groups that received phenol with 75 and 100 mg/kg dosages compared with control group had decreased significantly (P< 0.05) whereas weight, length, width and thickness of testes in experimental group compared with control group didnot show any significant deference. Considering the weight of tunica albuginea only in the group received 75 mg/kg of phenol a significant decrease was seen (P< 0.05). In measuring the diameter of seminiferous tubules and thickness of germinal epithelium there was a significant deference between the control group and the groups received phenol at 30 and 75 mg/kg (P< 0.05). The results for daily sperm production, motility and fertility show that DSP in the group received phenol at 75 and 100 mg/kg and viability of sperm in all experimental groups compared with control group showed significant (P< 0.05). In histological sections of testes in experimental groups an increasing in thickness of basement membrane of germinal epithelium, increasing in gaps between seminiferous tubules, degeneration of interstitial tissue and seminiferous tubules, deformation of nuclei in some spermatogens, irregulation of cells in germinal epithelium and decreasing of spermatogens, increasing in vacuolation of leydig cells and decreasing in acidiphilic aspect of cytoplasm were observed. At electronic microscopy level, in basement membrane of seminiferous tubules, decreasing in thickness of lamina densa and increasing in thickness of lamina lucida in experimental groups which received phenol at 30 and 75 mg/kg compared with the control group were observed. But in the group which received phenol at 100 mg/kg there was not a significant decreasing compared with the control group. In comparison of the transverse section of sperm flagella and observing its axonem, in experimental groups compared with the control group, a decreasing in density of fibers of fiber sheat sorroundin the axonem was observed. According to the obtained results, phenol can decrease fertility through effect on the motility of sperm and the membrane covering its axonem, and decreasin in number of sperms for the reason of probable influence on division of spermatogens resulting decrease in the height of germinal epithelium and also influence on basement membrane resulting a probable decrease in nutrient supply and also its effect on the intact sperms.
